殺稻瘟菌素S（Blasticidin S）是從灰色鏈霉菌中分離出的一種肽基核苷類抗生素。它是細(xì)菌和真核細(xì)胞中蛋白合成的強效抑制劑，同時對真菌、線蟲和腫瘤細(xì)胞也具有活性。殺稻瘟菌素 S 通過阻斷釋放因子誘導(dǎo)的肽基-tRNA 水解而起作用，并抑制肽鍵形成。可用作哺乳動物細(xì)胞和細(xì)菌細(xì)胞的選擇劑。

殺稻瘟菌素S常用于篩選攜帶bsr/BSD/bls基因（常標(biāo)記為bsrr/bsdr/Blastr）質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，具有快速而強效的作用模式，很低的抗生素濃度便能使未攜帶抗性基因的細(xì)胞迅速死亡。

產(chǎn)品信息

使用說明

1. 推薦使用濃度

表1 部分細(xì)胞系的推薦濃度（最佳濃度需要殺滅曲線來測定）：

2. 殺稻瘟菌素S殺滅曲線的測定（以慢病毒轉(zhuǎn)染為例）：

  殺稻瘟菌素S有效篩選濃度跟細(xì)胞類型、生長狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān)。

在穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選中，通常需要事先查閱文獻或?qū)嶒灉y定來確定能殺死未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的最低的殺稻瘟菌素S濃度，該濃度既可以保障后續(xù)穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選時添加的殺稻瘟菌素S劑量對未轉(zhuǎn)染成功細(xì)胞具有足夠的殺傷作用，也可以保障對已轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞的毒性最小。建議初次做實驗時先測定適合自身實驗體系的殺傷曲線（kill curve）。

1) Day 1：24孔板內(nèi)以5-8×10⁴ cells/孔的密度鋪板，37℃培養(yǎng)過夜。

2) Day 2：①準(zhǔn)備含藥培養(yǎng)基：含不同濃度梯度殺稻瘟菌素S的新鮮培養(yǎng)基（如0-50 μg/mL，至少5個梯度）；②將各孔換為各梯度含藥培養(yǎng)基，37℃繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。

3) Day 3-6：每48 h更換新鮮的含藥培養(yǎng)基，持續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，并觀察細(xì)胞存活率。

4) 每日監(jiān)測細(xì)胞，觀察存活細(xì)胞率，確定加藥開始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染細(xì)胞的最低藥物濃度。

3. 哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選：

轉(zhuǎn)染抗性基因后，將細(xì)胞在含有篩選抗生素的培養(yǎng)基中持續(xù)培養(yǎng)，殺死非轉(zhuǎn)染細(xì)胞后即可篩選出穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。

1) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后，將細(xì)胞置于含有適當(dāng)濃度篩選抗生素的新鮮培養(yǎng)基中持續(xù)培養(yǎng)。

注意：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時，抗生素作用最明顯。細(xì)胞過于密集，抗生素殺傷效力會明顯下降。最好在進行細(xì)胞傳代時，適當(dāng)調(diào)整傳代比例，使其傳代后密度不超過25%。

2) 每隔48-72 h更換新鮮的篩選培養(yǎng)基。

3) 篩選開始7天后可以對細(xì)胞株進行鑒定，以確定穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選是否完成。穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選通常需要持續(xù)1-2周或者更多時間，時間長短和宿主細(xì)胞系、轉(zhuǎn)染效率有關(guān)。

4) 篩選完成后，可以根據(jù)需要，進行傳代擴增、凍存保種。

5) 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株一旦建立成功，在后續(xù)的培養(yǎng)過程中可以根據(jù)自己的需要持續(xù)添加較低濃度篩選抗生素以保持其純度的穩(wěn)定，通常選擇篩選濃度的50%作為維持濃度。

注意事項

1. 殺稻瘟菌素S為有毒化合物，操作時請做好相關(guān)防護。

2. 本產(chǎn)品已經(jīng)過0.1 μm過濾除菌，融化后可直接使用。

3. 使用本產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作，避免污染。

4. 產(chǎn)品應(yīng)置于2-8℃中解凍，搖勻后使用，不建議反復(fù)凍融。

5. 若解凍后有析出物，可以渦旋混勻或用移液器吹打混勻，室溫靜置1小時左右或者37℃培養(yǎng)箱放置20-30分鐘后觀察析出物是否可以正常溶解，能溶解則可正常使用。

6. 本產(chǎn)品為濃縮液，請根據(jù)需要稀釋后使用。

7. 常規(guī)2-8℃保藏建議一月內(nèi)使用完畢為宜；長期不用需-5~-20℃冷凍保藏，不宜室溫或者2-8℃長期保藏；為避免反復(fù)凍融，用量較少時建議進行分裝后冷凍保藏。

8. 本產(chǎn)品僅用于科研或進一步研究使用，不用于診斷和治療。