由普諾賽技術(shù)團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化的人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（含血替），經(jīng)篩選配比的無(wú)血清添加物及其他輔助 成分。該產(chǎn)品適用于人間質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清條件的培養(yǎng)；可維持人間質(zhì)干細(xì)胞良好的增殖速率，并保持良好的分化能力。

人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（含血替）是專為人類間充質(zhì)干細(xì)胞（包括臍帶間充質(zhì)、骨髓間充質(zhì)、脂肪間充質(zhì)等干細(xì)胞）設(shè)計(jì)的無(wú)血清培養(yǎng)基。在干細(xì)胞分離過(guò)程中，當(dāng)細(xì)胞貼壁率達(dá)到75-85%后，可使用此培養(yǎng)基進(jìn)行傳代。與傳統(tǒng)的添加動(dòng)物血清的培養(yǎng)基相比，人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（含血替）維持間充質(zhì)干細(xì)胞的無(wú)分化生長(zhǎng)，保持細(xì)胞的形態(tài)特征和正常的傳代次數(shù)等，保證間充質(zhì)干細(xì)胞的高增殖率以及分化潛能。

產(chǎn)品信息

人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（含血替）的主要組成成分：氨基酸，維生素、無(wú)機(jī)鹽、 白蛋白、血清替代物、微量元素等。

產(chǎn)品使用說(shuō)明

1、人間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基（含血替）準(zhǔn)備

將CM-SC02無(wú)血清培養(yǎng)基添加劑在2-8℃過(guò)夜融化，按1:50比例加入CM-SC02無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，即得到人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清（含血替）的完全培養(yǎng)基。

溫馨提示：配好的人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清（含血替）的完全培養(yǎng)基在2-8℃避光條件下，可保存30天。若小量、多次使用，建議您將CM-SC02無(wú)血清培養(yǎng)基添加劑分裝后，保存于-5~-20℃冰箱，可避免培養(yǎng)基不必要的浪費(fèi)。

2、人間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇（以T-75瓶為例）

① 從冰箱中取出完全培養(yǎng)基，在生物安全柜或超凈臺(tái)中吸取適量（如T-75瓶：10-15 mL）完全培養(yǎng)基沿上表面加入間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，切勿沖到細(xì)胞培養(yǎng)瓶底面，即：細(xì)胞生長(zhǎng)面。然后慢慢將細(xì)胞培養(yǎng)瓶平放，在37℃、恒溫CO2培養(yǎng)箱中放置5-10分鐘后使用。

溫馨提示：請(qǐng)嚴(yán)格按照此步驟操作，否則可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)胞生長(zhǎng)空白區(qū)域，即所謂的“生長(zhǎng)空洞”。多數(shù)用戶使用的不是專用的預(yù)包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶，而是普通的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿，其表面環(huán)境并不利于無(wú)血清培養(yǎng)環(huán)境下的間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁。37℃放置5-10分鐘，可讓培養(yǎng)基中的促貼壁物質(zhì)更好地與細(xì)胞培養(yǎng)瓶底部結(jié)合，使得間充質(zhì)干細(xì)胞的貼壁能力增強(qiáng)，降低“生長(zhǎng)空洞”出現(xiàn)的概率。

② 從液氮中取出凍存的間充質(zhì)干細(xì)胞，迅速將凍存管放入37℃水浴中，快速融解。

溫馨提示：盡可能避免水沒(méi)過(guò)管帽，以減少污染的風(fēng)險(xiǎn)；要快速完成細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程（盡量控制在1分鐘內(nèi)），融化過(guò)程時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)造成復(fù)蘇后細(xì)胞活性較差。

③ 用70-75%酒精消毒凍存管外壁，在生物安全柜或超凈臺(tái)中打開凍存管，用吸管/移液器將細(xì)胞凍存懸液緩慢移入裝有5-10 mL細(xì)胞完全培養(yǎng)基的15 mL離心管中（在這一過(guò)程請(qǐng)盡可能避免產(chǎn)生氣泡）。

溫馨提示：為了減少細(xì)胞損失，往細(xì)胞凍存管中加入1 mL完全培養(yǎng)基，稍微吹打，用吸管/移液器將這1 mL的細(xì)胞懸液吸入離心管中，再用吸管/移液器將離心管中的細(xì)胞輕輕吹打混勻。

④ 1200 rpm離心5 min，棄上清，加入2 mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，按密度2×104 cells/cm²將細(xì)胞接種至步驟①中孵育完的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，添加細(xì)胞時(shí)，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶豎立，細(xì)胞懸液直接加到底部，切忌沖到細(xì)胞培養(yǎng)瓶底面。

⑤ 輕輕搖晃細(xì)胞培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞均勻分布，混勻后，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

⑥ 24 h后，更換新鮮的完全培養(yǎng)基（溫育至37℃）。

3、人間充質(zhì)干細(xì)胞傳代（以T-75瓶為例）

① 在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80-90%，即可傳代。

  溫馨提示：細(xì)胞融合度請(qǐng)勿超過(guò)90%。很多傳代后的細(xì)胞大比例死亡，是由于傳代前細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)密（融合度過(guò)高），導(dǎo)致細(xì)胞消化異常（細(xì)胞整片或成片脫落），加之隨后的不當(dāng)操作（如用移液器反復(fù)吹打成片細(xì)胞使其成為單個(gè)細(xì)胞），此機(jī)械損失過(guò)程會(huì)嚴(yán)重?fù)p害細(xì)胞膜，引發(fā)大比例的細(xì)胞死亡；間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)凍存后再次使用時(shí)，尤為明顯。

② 預(yù)處理細(xì)胞培養(yǎng)瓶，處理方法同細(xì)胞復(fù)蘇中的步驟①。

③ 在生物安全柜或超凈臺(tái)中，棄去細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，加入5-10 mLPBS清洗細(xì)胞后棄去，再加入2 mL0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞。

④ 在顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓時(shí)，立即加入5 mL胰酶抑制劑終止消化。

⑤ 用移液器輕輕吹打瓶壁上還未完全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完全分散。

⑥ 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15 mL離心管中，1200 rpm離心5 min。棄上清，加入2 mL細(xì)胞完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，按細(xì)胞密度2×104cells/cm²，將細(xì)胞接種至細(xì)胞傳代②步驟中孵育完的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，添加細(xì)胞時(shí)，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶豎立，細(xì)胞懸液直接加到底部，切忌沖到細(xì)胞培養(yǎng)瓶底面。

⑦ 輕輕搖晃細(xì)胞培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞均勻分布，混勻后，置于37℃、5%CO₂、飽和濕度的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

4、人間充質(zhì)干細(xì)胞凍存

① 用0.05%胰酶-EDTA消化待凍存的細(xì)胞，加入胰酶抑制劑終止消化并離心，重懸后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

② 1200 rpm離心5 min，棄上清。

③ 根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)情況，緩慢加入適量冷的無(wú)血清凍存液（無(wú)血清凍存液可即拿即用或置于冰袋備用），調(diào)整細(xì)胞密度在1×10⁶ cells/mL左右。

④ 輕輕地重懸細(xì)胞，將重懸均勻的細(xì)胞按等份加入到滅菌的凍存管中（需提前做好標(biāo)記），旋緊凍存管蓋。

⑤ 迅速將凍存管放入程序降溫盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃冰箱。

⑥ 過(guò)夜放置后，將細(xì)胞從-80℃冰箱轉(zhuǎn)移至液氮罐中長(zhǎng)期保存。

注意事項(xiàng)

1. 使用本產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染；

2. 配制成完全培養(yǎng)基后，避光保存在2-8℃可存放3-4周；

3. 為了更好的使用效果，請(qǐng)勿對(duì)試劑進(jìn)行反復(fù)凍融；

4.本產(chǎn)品僅用于科研或進(jìn)一步研究使用，不用于診斷和治療。

CM-SC02.pdf