細(xì)胞系作為正?;蚰[瘤組織的模式細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物開發(fā),然而很大一部分的細(xì)胞系被錯(cuò)誤標(biāo)記或被其它個(gè)體、組織、種系來源的細(xì)胞所替代。
隨著越來越多的頂級(jí)雜志社多次發(fā)文呼吁重視細(xì)胞交叉污染及錯(cuò)誤辨識(shí)問題,選擇正確真實(shí)的細(xì)胞的重要性日趨提升,科研工作者在購(gòu)買細(xì)胞前一定要再三思慮,多方尋找,選擇好的細(xì)胞供應(yīng)商,選擇能提供細(xì)胞系鑒定報(bào)告的細(xì)胞供應(yīng)者,否則即使你付出再多的努力也都是白白的付諸東流。
為什么要進(jìn)行細(xì)胞系鑒定?
很多生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究都采用培養(yǎng)細(xì)胞來進(jìn)行,這些細(xì)胞可能是從細(xì)胞庫(如美國(guó)ATCC,American Type Culture Collection)得來,也可能是受贈(zèng)于其它研究人員;尤其在中國(guó),目前細(xì)胞的傳播太復(fù)雜、無序,很多都不是通過正規(guī)途徑獲得,如友情贈(zèng)送等。
據(jù)統(tǒng)計(jì),約有30%細(xì)胞系被交叉污染或錯(cuò)誤辨識(shí),因使用了交叉污染或錯(cuò)誤辨識(shí)的細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致研究結(jié)論錯(cuò)誤、結(jié)果不可重復(fù)、臨床細(xì)胞治療失敗等。不僅浪費(fèi)大量時(shí)間、精力和金錢,還可能造成不可挽回的災(zāi)難性后果。為此,很多細(xì)胞庫現(xiàn)在都要對(duì)提交來的細(xì)胞系進(jìn)行鑒定,并對(duì)細(xì)胞系之間的交叉污染進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
各種雜志多次發(fā)出呼吁,要求研究者對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定,NIH等權(quán)威機(jī)構(gòu)也將細(xì)胞系鑒定作為基金申請(qǐng)的前提條件。
人源細(xì)胞的鑒定——STR鑒定
STR(Short Tandem Repeat,短串聯(lián)重復(fù)序列)基因分型已被ICLAC、ATCC等權(quán)威機(jī)構(gòu)作為金標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用于細(xì)胞鑒定,目前主要基于國(guó)際身份認(rèn)證委員會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn),可以通過多重?zé)晒釶CR技術(shù),對(duì)人源8個(gè)STR位點(diǎn)以及1個(gè)性別決定位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。
非人源細(xì)胞的鑒定——種屬鑒定
STR鑒定已經(jīng)成為細(xì)胞身份確認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn),但是STR鑒定目前只適用于人及小鼠等少數(shù)幾個(gè)種屬的細(xì)胞,那么對(duì)于非人源的細(xì)胞我們應(yīng)該如何去鑒定呢?
通常情況下,對(duì)于非人源細(xì)胞,我們首先要解決的是交叉污染的問題,確保使用的細(xì)胞是所需要的單一來源的細(xì)胞。而解決的方法就是細(xì)胞的種屬鑒定,目前常見的細(xì)胞種屬鑒定方法有染色體分析、同工酶分析、DNA條碼測(cè)序及PCR法等。這幾種方法中,最常用、最普遍的為PCR法。
PCR法鑒定細(xì)胞來源種屬
方法一:
針對(duì)常用種屬的細(xì)胞(人、大鼠、小鼠),使用種屬特異性的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)目的條帶,來判斷細(xì)胞的種屬及是否存在不同種屬來源的細(xì)胞交叉污染。
左圖為包含人源細(xì)胞污染的小鼠細(xì)胞;右圖為單一來源的小鼠細(xì)胞
方法二:
提取細(xì)胞DNA,用種屬?gòu)?fù)合引物MIX對(duì)動(dòng)物線粒體COXI基因擴(kuò)增,然后用遺傳分析儀對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)和分析。
擴(kuò)增結(jié)果顯示為大鼠細(xì)胞,且無其他種屬細(xì)胞交叉污染
種屬鑒定結(jié)果判定一般包含兩項(xiàng):是否為單一種屬來源細(xì)胞以及來源細(xì)胞種屬。
除了必要的種屬鑒定外,在使用細(xì)胞之前可針對(duì)自身需求對(duì)細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞特性的鑒定,如免疫熒光或流式檢測(cè)等。
普諾賽(Procell)是一家專注于研發(fā)和生產(chǎn)原代細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑產(chǎn)品的生物高科技企業(yè),可以為各類研究機(jī)構(gòu)提供符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的原代細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)。
公司已對(duì)公司網(wǎng)站上提供的所有人源細(xì)胞系進(jìn)行全面的STR鑒定,經(jīng)STR鑒定通過的細(xì)胞系的鑒定報(bào)告將免費(fèi)提供給所有下單訂購(gòu)細(xì)胞的客戶!
此外,普諾賽所有在售大鼠細(xì)胞系,均應(yīng)用PCR擴(kuò)增→凝膠電泳跑膠進(jìn)行種屬鑒定;對(duì)于所有在售小鼠細(xì)胞系,除了極少數(shù)采用PCR擴(kuò)增→凝膠電泳跑膠之外,其它均應(yīng)用STR鑒定,以判斷培養(yǎng)細(xì)胞是否存在種屬間的交叉污染,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
普諾賽將始終確保為客戶提供的細(xì)胞具有真實(shí)性、正確性,無交叉污染,消除客戶因購(gòu)買細(xì)胞而產(chǎn)生的質(zhì)量和真假的后顧之憂,以最大的誠(chéng)意提供信息最全面的細(xì)胞產(chǎn)品。