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細(xì)胞凍存和復(fù)蘇需要注意什么？
來源：Pricella 瀏覽量： 發(fā)布時(shí)間：2023-03-24 15:44:06
細(xì)胞凍存：
1. DMSO配制的時(shí)候會(huì)放熱，一定要等凍存液冷卻后使用，避免灼傷細(xì)胞；
2. 細(xì)胞離心后，盡量吸干凈上清液，減少培養(yǎng)基殘留，避免稀釋凍存液；
3. 不建議手動(dòng)梯度降溫，因?yàn)闇囟炔环€(wěn)定，容易降低存活率；
4. 程序降溫盒內(nèi)異丙醇的量必須高于最低刻度線；凍存5次后，異丙醇需要更換一次，以免影響凍存效果；程序降溫盒需恢復(fù)到室溫以后才能繼續(xù)使用，不能從冰箱拿出來直接使用；
5. 細(xì)胞懸液加入凍存液后，避免在常溫下長(zhǎng)時(shí)間放置，因?yàn)镈MSO常溫下對(duì)細(xì)胞損傷大；分裝完成后立即轉(zhuǎn)入程序降溫盒放到-80℃冰箱，不需要放4℃冰箱；
6. -80℃凍存過夜后，可以轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存；轉(zhuǎn)入液氮的過程需要對(duì)凍存盒進(jìn)行保冷，不要長(zhǎng)時(shí)間在常溫放置，避免凍存管融化；
7. 若沒有液氮罐，存放在-80℃的時(shí)候，一定要放靠里面的位置，避免開關(guān)冰箱導(dǎo)致溫度不穩(wěn)定；
8. 細(xì)胞凍存后應(yīng)取出一管復(fù)蘇，檢測(cè)細(xì)胞的存活率。理論上細(xì)胞可在液氮內(nèi)長(zhǎng)期保存，為穩(wěn)妥起見，可在細(xì)胞凍存半年后復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，再繼續(xù)凍存；
9. 若沒有使用凍存盒，在轉(zhuǎn)入液氮的過程中一定要對(duì)凍存管做好保冷措施，不能直接用手拿，可以用干冰或者少量液氮保護(hù)后轉(zhuǎn)移，操作過程注意安全；
10. 轉(zhuǎn)移過程要快，避免凍存管暴露于常溫后融化。
細(xì)胞復(fù)蘇：
1. 如果水浴鍋與液氮罐未被放置于同一個(gè)房間，需要對(duì)凍存管進(jìn)行保冷后，再轉(zhuǎn)移到水浴鍋旁，避免路途細(xì)胞表面融化；
2. 細(xì)胞溶解過程要快速搖晃以加速溶解；
3. 已溶解的凍存細(xì)胞避免長(zhǎng)時(shí)間在常溫存放，需盡快離心去除DMSO；
4. 貼壁細(xì)胞復(fù)蘇24小時(shí)后觀察，若密度達(dá)到80%，則正常傳代；若密度不到80%，則繼續(xù)培養(yǎng)到48小時(shí)再換液；
5. 懸浮細(xì)胞復(fù)蘇3天內(nèi)不建議離心換液；
6. 對(duì)DMSO不敏感的細(xì)胞在復(fù)蘇時(shí)也可不離心；減少操作步驟，也可降低污染的幾率。將解凍的細(xì)胞懸液直接轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。但培養(yǎng)12~24小時(shí)后，必須換新鮮的培養(yǎng)基，移除死細(xì)胞。
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