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細(xì)胞學(xué)堂 | 原代細(xì)胞的取材方法
來源：Pricella 瀏覽量： 發(fā)布時間：2023-05-17 09:23:17
人和動物體內(nèi)絕大部分組織都可以在體外培養(yǎng)，但其難易程度與組織類型、分化程度、供體的年齡、原代培養(yǎng)方法等有直接關(guān)系。原代取材是進行組織細(xì)胞培養(yǎng)的第一步，也是非常關(guān)鍵的一步，將直接影響后續(xù)實驗的正常進行。本期細(xì)胞學(xué)堂將詳述取材基本要求及各類組織取材方法。
取材基本要求
取材的基本器材和用品：
01
眼科組織彎剪、彎鑷、手術(shù)刀（用前消毒）；
02
裝有無血清培養(yǎng)基或Hanks液的小瓶；
03
小燒杯（10mL，50mL）;
04
培養(yǎng)皿。
不同組織取材方法
鼠胚組織的取材
因為小鼠的毛中隱藏微生物較多，而且不易消毒，所以取材時更要注意無菌消毒，其無菌消毒一般采用以下方法進行：
1
用引頸法殺死動物，然后將其整個浸入盛有75%乙醇的燒杯中3~5min，注意時間不能太長，以免乙醇從口和其他孔道進入體內(nèi)，影響組織活力；
2
取出后放在消毒過的固定板上，用消毒過的圖釘或大頭針將其固定；
3
用眼科剪和止血鉗剪開皮膚解剖取材。
也可在乙醇消毒后，在動物軀干中部環(huán)形剪開皮膚，用止血鉗分別挾住兩側(cè)皮膚拉向頭尾把動物反包，暴露軀干，然后再固定解剖取材。取好的組織要放置在另一干凈的無菌平皿中或玻璃板上進行原代培養(yǎng)操作。動物消毒后的操作宜在超凈臺內(nèi)或無菌環(huán)境中進行。
雞胚組織的取材
一般使用雞胚時應(yīng)自行孵育。主要步驟為：精選新鮮受精雞蛋，擦掉表面的臟物，置37℃普通溫箱中孵育，箱內(nèi)同時放一盛水的平皿以維持培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度。一般采用9-12d的雞胚，在這期間，每天翻動雞蛋1次。于無菌條件下，將蛋以氣室（大頭）向上放在1個小燒杯中，碘酒、乙醇消毒。用剪刀環(huán)形剪除氣室端蛋殼，切開蛋膜，暴露出雞胚，用鈍彎頭玻璃棒伸入蛋中輕輕挑起雞胚、放入無菌培養(yǎng)皿中，根據(jù)需要取材。
皮膚和黏膜的取材
一般皮膚、黏膜主要取自手術(shù)過程中切除的部分組織；如特殊需要也可酌情單獨取材。方法似外科取斷層皮片手術(shù)的操作，但面積一般在2~3mm2即可。這樣局部不留瘢痕。注意取材時不要用碘酒消毒，必要時可用高濃度抗生素溶液漂洗。
內(nèi)臟和實體瘤的取材
內(nèi)臟和實體瘤取材時，一定要明確和熟悉自己所需組織類型和部位，要修剪去除不需要部分如血管、神經(jīng)和組織間的結(jié)締組織；取腫瘤組織時要盡可能取腫瘤細(xì)胞分布較多的部分，避開壞死液化區(qū)域。
血細(xì)胞的取材
一般多采用靜脈取血，微量時也可以從指尖或耳垂取血。為防止凝血常用肝素抗凝劑，抗凝劑的量以產(chǎn)生抗凝效果的最小量為宜，量過大易導(dǎo)致溶血。肝素常用濃度為20U/mL，抽血前針管要用濃度較高的肝素（500U/mL）濕潤。抽血時要嚴(yán)格無菌。
骨髓、羊水、胸水、腹水內(nèi)細(xì)胞的取材
這幾種樣品取材后一般不需要其他處理，離心后最好立即培養(yǎng)，不宜低溫保存。
參考文獻
[1] 司徒鎮(zhèn)強, 吳軍正. 細(xì)胞培養(yǎng)-第2版[M]. 世界圖書出版公司, 2007.
