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細胞學堂|MEG-01培養(yǎng)注意事項
來源:Pricella 瀏覽量: 發(fā)布時間:2023-07-10 15:21:25
1
細胞名稱
MEG-01 (人成巨核細胞白血病細胞)
2
別名
Meg-01; MEG01; Meg01
3
細胞培養(yǎng)條件
RPMI-1640+10% FBS+1% P/S,37℃;5% CO2
4
生長特性
半貼半懸
5
細胞形態(tài)
淋巴母細胞樣
MEG-01是一種巨核母細胞系,該細胞來自于一名費城染色體(Ph)陽性的慢性粒細胞性白血病(CML)患者。1983年由Michinori Ogura, Yasuo Morishima等人從一名55歲患有慢性粒細胞性白血?。–ML)且處于CML爆發(fā)危機的男性的骨髓樣本中提取。
MEG-01細胞沒懸浮的細胞大多為圓形或者卵圓形,貼壁的細胞會伸出偽足。細胞質(zhì)相對嗜堿性,并含有少量空泡,還觀察到細胞質(zhì)突起。單克隆抗體的間接免疫熒光試驗顯示,MEG-01細胞表面的FVIII相關(guān)抗原呈陰性,該抗原在MEG-01細胞特別是大細胞的細胞質(zhì)中呈陽性。所有細胞均呈彌漫性和細顆粒狀的酸性磷酸酶強陽性。
MEG-01不僅為研究人類巨核細胞分化和成熟提供研究模型,而且為血小板或蛋白質(zhì)如FVIII相關(guān)抗原、血小板糖蛋白或血小板衍生生長因子(PDGF)等的產(chǎn)生和釋放提供一種有用的研究模型。
培養(yǎng)中始終存在一些黑點樣碎片,不需要特殊處理。大部分細胞呈不規(guī)則圓形懸浮狀態(tài),有少量細胞呈梭形貼壁。
以T25瓶為例
1
該細胞為半貼壁半懸浮細胞,其中貼壁細胞較少或到50%均為正常,可以按懸浮細胞的培養(yǎng)方式傳代,貼壁部分吹下即可(如遇吹不下來,可用0.25%胰酶適當消化);
2
維持細胞密度在3-10×105cells/mL培養(yǎng),初始接種密度不低于3×105cells/mL,長到10×105cells/mL左右進行傳代。建議前期計數(shù)后操作,后面可以根據(jù)經(jīng)驗傳代;
3
每隔3天計數(shù)操作一次,如密度低于3×105cells/mL可更換小體積容器(如孔板)進行培養(yǎng);
4
根據(jù)細胞密度選擇其中一種操作方法:
半換液。如密度不足8×105cells/mL則進行半換液;緩緩吸出上層一半的培養(yǎng)液,于1200 rpm(250g左右) 3min離心收集細胞,加入等體積新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,輕輕吹打3-5次,接回原瓶繼續(xù)培養(yǎng);
1:2稀釋傳代。如密度接近10×105cells/mL左右,則將細胞等體積分裝到兩個新培養(yǎng)瓶,每瓶分別補加新鮮培養(yǎng)基到總體積5mL;
全離心換液或傳代。細胞每持續(xù)培養(yǎng)超一周可進行一次全離心換液或者傳代,不建議頻繁用離心的方式換液或傳代;離心轉(zhuǎn)速推薦1200rpm 3min。
推薦凍存密度:
3~5×106 cells/mL ;
凍存液配比:
55% RPMI-1640 +40% FBS+5%DMSO,需使用程序凍存盒梯度降溫凍存。
生長圖片
圖1:建系文檔中的MEG-01細胞圖
圖2:ATCC培養(yǎng)圖,來源于ATCC
圖3:普諾賽培養(yǎng)圖
細胞背景資料詳細信息
參考文獻:
[1] Ogura M, et al. Establishment of a novel human megakaryoblastic leukemia cell line, MEG- 01, with positive Philadelphia chromosome. Blood 66: 1384-1392, 1985. PubMed: 2998511