原代細胞傳代方法哪有幾種？

　　原代細胞是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養(yǎng)的細胞，稱為原代細胞。

　　一般認為，培養(yǎng)的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。

　　那么關于原代細胞的傳代培養(yǎng)，我們應該怎么做呢?一般有以下兩種方法：

　　一、貼壁細胞的消化法傳代

　　1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。

　　2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使瓶底細胞都浸入溶液中。

　　3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進行觀察，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時，棄去消化液，加入培養(yǎng)液終止消化。

　　4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

　　二、懸浮細胞的傳代

　　1、直接傳代

　?、?讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。

　?、?用吸管吹打形成細胞懸液后，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

　　2、離心法傳代

　?、?將細胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，離心800-1000rpm，5分鐘。

　?、?去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打使之形成細胞懸液。

　?、?將細胞懸液分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。