細(xì)胞鋪板的3種手法，這樣鋪更均勻！

細(xì)胞鋪板是細(xì)胞實驗中最常見又必須掌握的一門技術(shù)，看似簡單，然而卻經(jīng)常遇到如細(xì)胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現(xiàn)象，結(jié)果就是只能整板扔掉，重新鋪板，既耽擱時間又浪費了細(xì)胞及培養(yǎng)板等資源。歷經(jīng)多次失敗后，你才會發(fā)現(xiàn)，原來細(xì)胞鋪板是有規(guī)律可循的，今天我們就聊一聊：細(xì)胞鋪板的3種手法。

首先，我們來看看細(xì)胞鋪板不均勻的3種最常見情況：

1、中間多，周圍少

2、中間少，四周多

3、呈現(xiàn)一坨一坨的狀態(tài)

這么多種不均勻的情況，到底該怎么拯救呢？一起來看看細(xì)胞鋪板的三種手法：

手法一：均勻單層

要鋪成那種很均勻的單層細(xì)胞，手法如下：

1、細(xì)胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基，放入孵箱中放置10-20min。

2、在滴入細(xì)胞時，細(xì)胞板子與通風(fēng)櫥有一定的角度，沿著板壁的孔邊緣滴入。

3、滴入后，呈“8”字方法搖晃5-8次。

4、置于水平臺上，放置10-20分鐘

5、放入孵箱。

在細(xì)胞鋪板時，每一種板子的孔面積有多大，培養(yǎng)的液體量以及加入細(xì)胞量如下：

手法二：中間少，周圍多

其實細(xì)胞鋪板不一定都需要單個單個的那么均勻，比如，做免疫熒光時，學(xué)霸姐姐喜歡鋪中間少，周圍稍多的板子，

因為這個樣子可以同時檢測到單個細(xì)胞的形態(tài)，另外又可以照一點低倍的用作于統(tǒng)計，所有的細(xì)胞都在一個環(huán)境中。

特別說明一下：這里的多也只是相對于多，細(xì)胞也是單層的。

中間

周圍

要鋪這樣的細(xì)胞樣子，那鋪細(xì)胞時要注意手法了：

1、細(xì)胞板子不需要提前用培養(yǎng)基潤洗，直接從邊上滴入混有細(xì)胞的培養(yǎng)基。

2、放置30s-1min后，前后搖晃5-8次。

3、放在水平臺上靜置2-5min。

4、放入孵箱。

手法三：中間多，周圍少

學(xué)一般在提取蛋白或者提取RNA的時候，可以這樣鋪板，因為有些細(xì)胞刮刀不好用，沒有辦法刮到周圍的。想要鋪中間多，周圍少的板子，手法如下：

1、細(xì)胞板子不需要提前潤洗，從中間滴入進(jìn)去后。

2、把板子朝一個方向順時針或者逆時針旋轉(zhuǎn)3-5圈。

3、水平臺上靜置2-5min。

4、放入孵箱。

總結(jié)一下：想要細(xì)胞鋪板鋪得好，背景知識很重要

其實在鋪細(xì)胞的時候，你要準(zhǔn)確的知道你所養(yǎng)的細(xì)胞的特性，比如：

1、細(xì)胞的名稱，來源。

2、細(xì)胞的屬性。

3、細(xì)胞分裂時間。

還有，最主要的是要搞清楚你的細(xì)胞的生長曲線，還要知道鋪板后多久可以到達(dá)什么細(xì)胞密度。

如果你準(zhǔn)確的掌握了你的細(xì)胞特性，那鋪板是分分鐘搞定的事情。

細(xì)胞鋪板后，細(xì)胞狀態(tài)不好怎么辦？

如果出現(xiàn)這種情況，學(xué)霸姐姐建議你從以下幾個方面考慮一下原因：

1、用來鋪板的細(xì)胞狀態(tài)本身就不好。

2、用來鋪板的細(xì)胞傳代次數(shù)太多，有些老化。

3、胰酶消化時間過長。

4、中和的血清量及時間不夠。

5、支原體污染。

細(xì)胞鋪板是一個經(jīng)驗積累的過程，你的手法也需要積極的改進(jìn)，不要生搬硬套，也不要一味追求絕對的鋪均勻，在實驗過程中多思考細(xì)胞本身的特征和屬性，出現(xiàn)問題積極解決即可。