細胞學堂 | Advanced培養(yǎng)基：更優(yōu)質的細胞培養(yǎng)選擇
在細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的重要性不言而喻。它不僅是細胞生長和增殖的物質基礎，還直接影響著細胞的生長狀態(tài)、表型、功能以及實驗的準確性和可重復性。培養(yǎng)細胞時，通常會添加10%的血清，然而，這種做法伴隨著成本高、批次間差異大以及潛在的污染風險等問題。
為了解決這些難題，普諾賽通過優(yōu)化經(jīng)典的基礎培養(yǎng)基配方，成功開發(fā)出Advanced系列培養(yǎng)基，包括Advanced RPMI-1640、Advanced DMEM、Advanced DMEM/F12及Advanced MEM四款產(chǎn)品。Advanced培養(yǎng)基能夠有效減少血清使用量，提供更穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境。
本文將詳細介紹Advanced培養(yǎng)基的優(yōu)勢、細胞適應和在使用中的注意事項，幫助您更好地了解和使用這一類培養(yǎng)基。
01 Advanced培養(yǎng)基優(yōu)勢
減少血清依賴，降低實驗變異性
血清在傳統(tǒng)培養(yǎng)基中的主要作用是為細胞提供必要的營養(yǎng)和生長因子，但由于血清成分復雜且存在批次間差異，可能導致實驗結果的波動性。Advanced培養(yǎng)基通過減少血清的使用量，有效降低了這些變異性，提高了實驗的可重復性和一致性。
可直接替代基礎培養(yǎng)基
用Advanced培養(yǎng)基替換基礎培養(yǎng)基，僅需添加L-丙氨酰-L-谷氨酰胺或L-谷氨酰胺以及減少添加量血清，即可制備完全培養(yǎng)基。對于大多數(shù)細胞系，無需馴化或經(jīng)間接適應過程，即可將培養(yǎng)基中的血清用量減少至少50%。
減少血清使用量而不影響細胞生長性能
Advanced培養(yǎng)基成分經(jīng)過優(yōu)化后，能夠為細胞提供更合適的生長環(huán)境，減少不必要的成分干擾。與經(jīng)典完全培養(yǎng)基（含10%血清）相比，多種細胞在Advanced培養(yǎng)基中減血清（含2-5%血清，甚至更低）培養(yǎng)，表現(xiàn)出相同甚至更優(yōu)的增殖效果，且細胞形態(tài)不發(fā)生顯著變化。
02 細胞適應
更換培養(yǎng)基時進行細胞適應測試是為了減少細胞應激反應，使其逐漸適應新的環(huán)境，避免突然變化培養(yǎng)條件導致細胞生長變慢甚至死亡。
對于大多數(shù)細胞系，在使用Advanced培養(yǎng)基時無需適應，可直接降低50%血清用量而不影響細胞狀態(tài)（參考直接適應的方法）。
如果觀察到細胞生長速度變慢、形態(tài)改變、次級代謝物產(chǎn)生水平不理想或需要進一步降低血清濃度時，則需采取一定的方法使之逐漸適應低血清環(huán)境（參考間接適應的方法）。
直接適應
直接使用降低50%胎牛血清的Advanced培養(yǎng)基，替換原有的完全培養(yǎng)基，按照常規(guī)培養(yǎng)方法換液和傳代培養(yǎng)；
細胞能夠持續(xù)增長維持3代以上，即認為已經(jīng)適應新培養(yǎng)基。
間接適應
按照Advanced完培:原配方完培=25:75的比例混合新舊培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)細胞；
監(jiān)測細胞生長和傳代培養(yǎng)，逐步增加新培養(yǎng)基的比例，直至全部更換為Advanced完培，參考25:75 → 50:50 → 75:25 → 90:10 → 100:0的順序（每個步驟可能需要多次重復，直至細胞完全適應新的減血清培養(yǎng)基）；
在100%的Advanced完全培養(yǎng)基中細胞持續(xù)增長3代以上，即認為已適應新培養(yǎng)基。
無需適應
經(jīng)過驗證，使用普諾賽®Advanced系列培養(yǎng)基時，以下細胞系無需間接適應步驟，即可直接培養(yǎng)：
1、使用Advanced RPMI-1640：
Vero、Raji、Daudi、Jurkat, Clone E6-1、THP-1、4T1、CT26.WT、PC-12 (High differentiation)、22RV1、BxPC-3、B16-F10
2、使用Advanced DMEM：
Vero、COS-7、A549、3T3-L1、HuH-7、MDA-MB-231、SW620、NRK-52E、A-673、C2C12、RH-35、Ishikawa、CHL
3、使用Advanced DMEM/F12：
Vero、LX-2、KGN、C8-D1A、Hela、NIH-3T3、KLE、ARPE-19、4T1、NIH-3T3、JHH-7、NCI-H2009
4、使用Advanced MEM：
Vero、HK-2、Hep G2、Caco-2、NCTC Clone 929、Hela、U-87 MG、HMC3、PK-15
03 Advanced培養(yǎng)基使用注意事項
1、并非所有的細胞都適合使用Advanced培養(yǎng)基減血清培養(yǎng)，嘗試減血清培養(yǎng)前，務必先用少量細胞測試使用效果，確保減血清對細胞狀態(tài)無影響后再進行大量替換。
2、Advanced培養(yǎng)基中特別添加了乙醇胺、谷胱甘肽等成分，以減少血清的使用量。通常情況下，細胞可減少原完全培養(yǎng)基至少一半的血清用量，如想進一步減少血清用量（如低至0.5-2%），需針對每種細胞系進行更低水平血清培養(yǎng)適應，以實現(xiàn)更大幅度的血清減少。
3、使用Advanced培養(yǎng)基雖能實現(xiàn)血清用量的減少，但對于血清品質的要求并未降低，建議使用高品質的胎牛血清進行細胞培養(yǎng)。
4、在細胞進行Advanced培養(yǎng)基減血清培養(yǎng)適應前，請確保細胞狀態(tài)良好。如更換培養(yǎng)基前存在細胞狀態(tài)差甚至有不易察覺污染的情況（如支原體或黑膠蟲污染），則細胞適應Advanced培養(yǎng)基減血清培養(yǎng)的成功率將大幅降低。
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