細(xì)胞學(xué)堂｜血清沉淀是污染嗎？如何避免血清沉淀？

血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和生長(zhǎng)因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。

作為培養(yǎng)細(xì)胞的好幫手，血清的品質(zhì)決定了細(xì)胞培養(yǎng)的成敗。血清中沉淀太多，不免讓人擔(dān)心影響細(xì)胞狀態(tài)。今天，普諾賽就圍繞血清沉淀，逐一解開大家心中的疑惑。

圖1. 血清沉淀

血清沉淀是什么？

在血清解凍后發(fā)現(xiàn)渾濁及絮狀物質(zhì)時(shí)，不必驚慌，這是正常現(xiàn)象。常見血清的沉淀物有以下幾種：

■ 纖維蛋白：可以用肉眼觀察到的、較大的沉淀物，可以達(dá)到1-2mm；

■ 磷酸鈣：常見的一種沉淀物，會(huì)造成血清渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，并且由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去像在活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染；

■ 其他：膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。

血清產(chǎn)生沉淀的機(jī)理

血清沉淀的形成機(jī)理多種多樣，具體的機(jī)理尚不十分明確。

血清沉淀的多少與血清質(zhì)量不成正比。如有血清沉淀產(chǎn)生，不必?fù)?dān)憂，通常400-600g離心5min，去除大顆粒沉淀，取上清液使用即可。

血清不建議過濾后使用，過濾可能會(huì)導(dǎo)致血清中部分營(yíng)養(yǎng)成分的流失。

血清沉淀是污染嗎？

前面提到過磷酸鈣在倒置顯微鏡下像小幅振動(dòng)的小黑點(diǎn)，容易被誤認(rèn)為是微生物污染，但其實(shí)血清沉淀并不是污染。由于在37℃的溫度下培養(yǎng)，會(huì)加劇磷酸鈣顆粒產(chǎn)生，故空培血清驗(yàn)證污染的方法也不太直觀。

我們可以通過將血清接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否存在細(xì)菌增殖，并且進(jìn)行革蘭氏染色，用油鏡觀察直接判斷是否為微生物污染。

血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)嗎？

血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性，各大品牌的血清均有沉淀的出現(xiàn)，根據(jù)普諾賽多年細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試經(jīng)驗(yàn)，血清沉淀的多少與血清的使用效果沒有必然關(guān)系。建議更換新批次血清的時(shí)候，取少量細(xì)胞進(jìn)行試培養(yǎng)，以確定是否影響后續(xù)細(xì)胞生長(zhǎng)。

如何避免沉淀出現(xiàn)？

正確的解凍方法

1、2℃~8℃解凍；

2、解凍的過程中間斷搖勻（隔一段時(shí)間輕柔搖勻）；

3、室溫或者水浴溶解均易造成沉淀增多。

正確使用和保存

1、非必須不用熱滅活（熱滅活會(huì)使血清中部分蛋白質(zhì)變性析出，影響血清品質(zhì)）；

2、不宜37℃預(yù)熱，血清和完全培養(yǎng)基通常室溫預(yù)熱即可；

3、避免反復(fù)凍融；

4、避免紫外線照射；

5、避免2-8℃長(zhǎng)期保存，分裝后-20℃長(zhǎng)期保存，按需溶解。