3T3-L1細(xì)胞是一種小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系，最早于1974年由Green和Kehinde等人從小鼠胚胎中分離得到。由于其具備在體外分化為類脂肪細(xì)胞的能力，這種細(xì)胞系被廣泛應(yīng)用于肥胖和糖尿病等代謝性疾病的研究中。

3T3-L1細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化步驟

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3T3-L1（小鼠胚胎成纖維細(xì)胞）正常培養(yǎng)，細(xì)胞的融合度達(dá)到80~90%時(shí)，即可用胰酶消化，計(jì)數(shù)。

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按2~3×10⁴ cells/cm²的細(xì)胞密度接種在六孔板中（具體接板數(shù)量以實(shí)際預(yù)實(shí)驗(yàn)情況為準(zhǔn)），每孔加入2 mL的3T3-L1細(xì)胞完全培養(yǎng)基。

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將均勻接種好的3T3-L1細(xì)胞置于37℃，5% CO₂的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

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當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%~95%時(shí)，小心的將孔內(nèi)完全培養(yǎng)基吸走，向六孔板中加入2 mL的3T3-L1細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基A液開始誘導(dǎo)。

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A液誘導(dǎo)2天后，吸走六孔板的誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基，每孔加入2 mL 3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基B液完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)1天。

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使用A 2天+B 1天交替的方法持續(xù)誘導(dǎo)。

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誘導(dǎo)試劑配制方法可參考3T3-L1 (小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基的說(shuō)明書，并按照說(shuō)明書操作對(duì)誘導(dǎo)結(jié)束后的細(xì)胞進(jìn)行油紅O染色。

開始誘導(dǎo)時(shí)的密度可控制在90%~95%或者剛好長(zhǎng)滿，注意避免細(xì)胞過(guò)度飽和導(dǎo)致細(xì)胞卷邊漂起或者狀態(tài)不佳，這可能會(huì)影響后續(xù)的分化效果。

鋪板需均勻，鋪板不均勻可能會(huì)導(dǎo)致分化不均勻，分化比例低，分化過(guò)程中細(xì)胞漂浮。

從添加誘導(dǎo)劑開始到分化結(jié)束，大概需要2周左右的時(shí)間（具體還需根據(jù)脂滴出現(xiàn)的情況，適當(dāng)延長(zhǎng)或者縮短誘導(dǎo)時(shí)間）。

3T3-L1細(xì)胞添加誘導(dǎo)劑時(shí)，手法要特別輕，誘導(dǎo)試劑需要提前37℃復(fù)溫后使用，加液時(shí)盡量用槍頭貼壁逐滴加入，讓液體慢慢流下，這樣對(duì)細(xì)胞的沖擊最小，否則極容易造成細(xì)胞卷邊飄起。

實(shí)驗(yàn)中所使用的溶劑遵循現(xiàn)用現(xiàn)配原則。

染色使用的油紅O染色液需要按說(shuō)明書稀釋后使用，飽和油紅O染色液不容易著色。

參考文獻(xiàn)