Mergene1000^? COS-7細(xì)胞專(zhuān)用DNA轉(zhuǎn)染試劑是一款性能優(yōu)良的DNA轉(zhuǎn)染試劑，可用于質(zhì)粒DNA的傳送。它具有較強(qiáng)的DNA轉(zhuǎn)染能力，專(zhuān)用于COS-7細(xì)胞，可得到較高轉(zhuǎn)染效率，具有毒性低、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)易操作流程圖

產(chǎn)品使用步驟

以24孔板為例，Mergene1000^? COS-7細(xì)胞專(zhuān)用DNA轉(zhuǎn)染試劑（μL）與質(zhì)粒DNA（μg）按照2.5:1比例混合，可根據(jù)情況在1:1到4:1的比例之間調(diào)整。其它規(guī)格培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿可參考表1的轉(zhuǎn)染推薦量。

l細(xì)胞鋪板

轉(zhuǎn)染前一天，每孔加入500 μL DMEM＋10% FBS＋1% P/S完全培養(yǎng)基，接種0.5×10⁵個(gè)細(xì)胞/孔，細(xì)胞培養(yǎng)12 h，可針對(duì)細(xì)胞實(shí)際狀態(tài)適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間，使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度達(dá)到60%-70%的融合度。

l轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備

1. 準(zhǔn)備2個(gè)無(wú)菌離心管，取一管加入0.4 μg質(zhì)粒和DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，終體積為10 μL，輕輕吹打混勻；另一管加入1.0 μL Mergene1000^? COS-7細(xì)胞專(zhuān)用DNA轉(zhuǎn)染試劑和9.0 μL DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，終體積為10 μL，吹打混勻后室溫孵育5 min。（以上是針對(duì)每孔細(xì)胞的制備量，請(qǐng)根據(jù)您的具體實(shí)驗(yàn)條件和需求，計(jì)算實(shí)驗(yàn)所需的制備量。）

2. 將上述兩管等體積稀釋液混合，輕輕吹打混勻，室溫靜置20 min。

l細(xì)胞轉(zhuǎn)染

1. 將制備的20 μL復(fù)合物逐滴加到細(xì)胞中，采用8字法混勻細(xì)胞培養(yǎng)板，放置37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2. 培養(yǎng)18-48 h后檢測(cè)基因表達(dá)。

                                         表1 COS-7細(xì)胞不同培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染參考用量

【注】該表使用量?jī)H供參考，DNA與Mergene1000^? COS-7細(xì)胞專(zhuān)用DNA轉(zhuǎn)染試劑具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞狀況及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。

注意事項(xiàng)

1. 以上步驟中的細(xì)胞接種量、轉(zhuǎn)染比例是實(shí)驗(yàn)室基于COS-7細(xì)胞摸索的結(jié)果，僅供參考。具體實(shí)驗(yàn)用量可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。

2. 該產(chǎn)品常溫運(yùn)輸，使用時(shí)可分裝保存，避免多次長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)蓋。

3. 需自備DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，用以稀釋質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑。

4. 轉(zhuǎn)染操作時(shí)，應(yīng)確保細(xì)胞融合度不低于60%，一般維持在60%至70%左右為宜。具體鋪板密度可根據(jù)細(xì)胞的實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。

5. 轉(zhuǎn)染后不需要除去轉(zhuǎn)染復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基。實(shí)際操作可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)4-6 h選擇更換培養(yǎng)基。

6. 使用高純度的無(wú)內(nèi)毒素DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。

7. 初次使用應(yīng)優(yōu)化質(zhì)粒濃度和試劑量以得到最高的轉(zhuǎn)染效率。

8. 本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科研用途。

9. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套無(wú)菌操作。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示（僅供參考）

圖1. Mergene1000^? COS-7細(xì)胞專(zhuān)用DNA轉(zhuǎn)染試劑用EGFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞的實(shí)拍明場(chǎng)和熒光照片。

圖2. Mergene1000^? COS-7細(xì)胞專(zhuān)用DNA轉(zhuǎn)染試劑用EGFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。

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