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細(xì)胞學(xué)堂|NCl-H520 (人肺鱗癌細(xì)胞) 培養(yǎng)注意事項(xiàng)盤點(diǎn)
來源:Pricella 瀏覽量: 發(fā)布時(shí)間:2023-08-17 14:09:37
NCI-H520細(xì)胞系是由A.F. Gazdar等在1982年從一名肺鱗狀細(xì)胞癌患者的肺標(biāo)本中提取的,呈上皮細(xì)胞樣,為貼壁細(xì)胞。本期細(xì)胞學(xué)堂為您整理了NCl-H520細(xì)胞的特性、培養(yǎng)步驟及注意事項(xiàng),幫助大家快速上手開展實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞信息:
1
細(xì)胞名稱:NCI-H520 (人肺鱗癌細(xì)胞)
2
別稱:H520; H-520; NCI-HUT-520; NCIH520
3
生長特性:上皮細(xì)胞樣,貼壁呈島狀生長
4
倍增時(shí)間:32-60h
5
細(xì)胞培養(yǎng)條件:
RPMI-1640+10%FBS+1%P/S;
氣相:空氣,95%;CO2,5%;
溫度:37℃
6
換液頻次:2~3次/周
7
傳代比例:1:2-1:4
(具體情況視實(shí)際細(xì)胞量決定)
傳代步驟
1
吸液
吸出原培養(yǎng)液;
2
潤洗
加入2mL左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3
加酶
加入1mL左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞;
4
消化
放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞變圓、有明顯間隙(約3-6min),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)培養(yǎng)瓶(皿),細(xì)胞大部分脫落時(shí)可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;加入3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞盡量呈單顆懸浮;
5
離心
收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
6
加培
養(yǎng)基
加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),后續(xù)觀察細(xì)胞生長情況。
換液步驟
換液
吸出舊的培養(yǎng)基,沿培養(yǎng)瓶(皿)側(cè)邊加入適量的新鮮培養(yǎng)基(沿非細(xì)胞貼壁生長面加入),2-3天換液一次。
注意事項(xiàng)
該細(xì)胞呈島狀聚集生長,控制消化時(shí)間尤為重要:消化時(shí)間過短時(shí),細(xì)胞不易從瓶(皿)壁脫落,吹打過度會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞碎裂增多,吹散不開的細(xì)胞團(tuán)塊也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞堆積影響生長;消化時(shí)間過長也可能導(dǎo)致細(xì)胞傳代后漂浮增多;
建議每隔一分鐘顯微鏡下觀察細(xì)胞消化狀態(tài),確認(rèn)細(xì)胞與細(xì)胞間明顯分離有間隙時(shí)再終止消化,使細(xì)胞盡量分散,避免聚團(tuán)。
消化傳代時(shí),吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免造成細(xì)胞碎裂增多;
該細(xì)胞生長過程中,培養(yǎng)基中始終有少量漂浮的細(xì)胞碎片,背景中可看到少量黑點(diǎn),換液可暫時(shí)改善,但繼續(xù)培養(yǎng)仍會(huì)出現(xiàn)無法避免。以上都是常見現(xiàn)象,不影響細(xì)胞增殖和實(shí)驗(yàn);
細(xì)胞生長偏慢時(shí),可以提高5-10%血清濃度(血清總濃度不超過 20%)培養(yǎng)一段時(shí)間,待細(xì)胞狀態(tài)和生長速度恢復(fù)正常后換回正常血清濃度。
該細(xì)胞貼壁展開較慢,復(fù)蘇24h后,大部分細(xì)胞呈不規(guī)則多邊形或圓形,細(xì)胞形態(tài)未完全展開,48h后可見細(xì)胞開始成片聚集生長;新復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞,可見較多漂浮,復(fù)蘇48h內(nèi)可先不換液,保留漂浮細(xì)胞繼續(xù)貼壁;
復(fù)蘇24h
復(fù)蘇48h
該細(xì)胞生長速度中等,細(xì)胞匯合度達(dá)到80%以上時(shí)即可傳代,1:2傳代約2-3天可再次傳代,1:3傳代約3-4天可再次傳代;
參考:80%細(xì)胞密度,可傳代