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最全MKN-45細胞知識總結(jié)

來源:Pricella  瀏覽量:  發(fā)布時間:2023-09-13 14:00:00



MKN-45細胞由Hojo H建立,源于日本一位62歲低分化胃腺癌女性患者的肝轉(zhuǎn)移灶,廣泛應用于癌癥檢測和治療的相關(guān)研究中。


本期細胞學堂為您整理了MKN-45細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)方法,幫助大家快速上手開展實驗~



細胞形態(tài)

MKN-45細胞呈半貼壁半懸浮生長,部分松散堆積,細胞排列不規(guī)則,生長中的細胞邊緣也不明確。

MKN-45細胞系相差顯微圖

MKN-45細胞系相差顯微圖[1]

MKN-45細胞顯微鏡圖

MKN-45細胞顯微鏡圖

MKN-45細胞顯微鏡圖

MKN-45細胞顯微鏡圖

MKN-45細胞顯微鏡圖,100X

MKN-45細胞顯微鏡圖,100X



超微結(jié)構(gòu)

掃描電鏡顯示MKN-45細胞相當扁平,細胞表面有大量的微絨毛,細胞邊緣有長線狀的細胞質(zhì)突起,相鄰的細胞呈橋粒連接。


MKN-45細胞掃描電鏡圖[1]

MKN-45細胞掃描電鏡圖[1]


MKN-45細胞掃描電鏡圖[1]

MKN-45細胞掃描電鏡圖[1]



裸鼠成瘤

裸鼠荷瘤實驗,即將細胞或組織通過原位或皮下移植到裸鼠體內(nèi)形成經(jīng)常潰瘍的腫瘤,觀察腫瘤的形成、發(fā)展及抗腫瘤藥物的效果。MKN-45為該實驗的常用細胞株。

將MKN-45細胞皮下移植到裸鼠體內(nèi)后,MKN-45異種移植物顯示侵襲性生長到宿主動物的皮下肌肉。


無胸腺裸鼠皮下MKN-45腫瘤[1]

無胸腺裸鼠皮下MKN-45腫瘤[1]




培養(yǎng)方法


MKN-4細胞為半貼壁半懸浮細胞,需分懸浮細胞和貼壁細胞兩部分處理。


懸浮細胞部分

直接收集培養(yǎng)基至離心管中1200rpm/min離心3min。

貼壁細胞部分

按照貼壁細胞的方式消化處理:

1

加入2mL左右PBS,輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞,吸出PBS(含有少量懸浮細胞,可轉(zhuǎn)移至收集了懸浮細胞的離心管中離心);

2

加入1mL左右0.25%含EDTA的胰酶,輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞;

3

放入培養(yǎng)箱消化,消化3-5min,顯微鏡下看到細胞中間的細胞明顯分離變圓,側(cè)立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化(消化時間主要看消化狀態(tài),如果沒有變圓,側(cè)立時不能滑落時,可適當延長30-60s),全程不要拍打培養(yǎng)瓶;

4

加入3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細胞使之脫壁并在液體里反復吹打使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液;

5

收集細胞懸液,1200rpm/min離心3分鐘,離心后吸出上清丟棄。



技巧與注意事項


01


由于細胞半貼壁半懸浮細胞,所以在消化傳代的時候需要注意收集漂浮的細胞,否則會造成細胞丟失;

02


如遇懸浮部分大塊聚團,則需要將懸浮部分收集到離心管離心后,加入胰酶進行消化處理,避免細胞團塊增多影響生長。


具體操作步驟如下:

1

將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管,離心(1200rpm 3min)后收集細胞;

2

去掉上清,用PBS重懸細胞,將細胞收集到一個離心管中;

3

離心后去掉上清,加入1mL左右0.25%胰酶重懸混勻細胞,振動離心管混勻即可,不能吹打,放入培養(yǎng)箱消化細胞(2~3分鐘,根據(jù)細胞特性決定消化時間);

4

消化一段時間后,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,使細胞團分散;

5

加入5mL含血清的培養(yǎng)基混勻后終止消化,離心(1200rpm 3min)。

6

收集細胞沉淀,與貼壁消化下來的部分細胞混合后分瓶接種。



參考文獻

[1] M. Sekiguchi, T. Suzuki.11 - Gastric Tumor Cell Lines.

https://doi.org/10.1016/B978-0-12-333530-2.50014-9.


(部分圖片來源于網(wǎng)絡)




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