Mergene1000? Hela細胞專用mRNA轉染試劑
英文名稱：Mergene1000® Hela Cell-Specific mRNA Transfection Reagent
貨號： 164424
價格： ￥220 ￥980 ￥1880
產品信息
| 產品簡介 | Mergene1000? Hela細胞專用mRNA轉染試劑是一款高性能的mRNA轉染試劑，專門用于mRNA的傳送。它能夠直接將mRNA遞送到細胞質中進行表達，從而避免了轉錄調控作用及進入細胞核的限制。該試劑專用于Hela細胞，可得到較高轉染效率，并具有毒性低、穩(wěn)定性好、操作簡單易行、重復性好等優(yōu)點。 |
| 產品形態(tài) | 液體 |
| 產品規(guī)格 | 100μL / 0.5mL / 1mL |
| 儲存條件 | 2-8℃ |
| 運輸條件 | 常溫 |
| 有效期 | 18個月 |
| 注意事項 |
1. 以上步驟中的細胞接種量、轉染比例是實驗室基于Hela細胞摸索的結果，僅供參考。具體實驗用量可根據實際情況進行調整。 2. 該產品常溫運輸，使用時可分裝保存，避免多次長時間開蓋。 3. 需自備MEM（含NEAA）培養(yǎng)基，用以稀釋mRNA和轉染試劑。 4. 轉染操作時，應確保細胞融合度不低于70%，一般維持在70%至90%左右為宜。具體鋪板密度可根據細胞的實際情況進行調整。 5. 轉染后不需要除去轉染復合物或更換新鮮培養(yǎng)基。實際操作可根據細胞狀態(tài)，轉染后培養(yǎng)4-6 h選擇更換培養(yǎng)基。 6. 使用高純度的mRNA有助于獲得較高的轉染效率。 7. 實驗過程使用無RNA酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。 8. 本產品僅限于專業(yè)人員的科研用途。 9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套無菌操作。 |
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期刊：NUCLEIC ACIDS RESEARCH
影響因子：13.1
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Q1:轉染過程中的培養(yǎng)基可使用抗生素嗎？
在轉染過程中，是否可以使用含抗生素的培養(yǎng)基取決于所使用的轉染試劑類型和實驗的具體需求。我們的這款轉染試劑，可以在培養(yǎng)基中添加抗生素（如青霉素 - 鏈霉素）。我們針對多種細胞系開展了實驗，分別在含有抗生素和不含抗生素的培養(yǎng)基中進行轉染，比較轉染效果，實驗結果顯示，兩種情況下并無顯著差異。然而，對于某些對轉染過程較為敏感的細胞類型，或者可能出現(xiàn)細胞毒性問題的情況，不加抗生素或許有助于改善最終結果。
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Q2:為什么我的基因在瞬時轉染的表達水平要高于穩(wěn)定轉染？
基因拷貝數(shù)差異：瞬時轉染時，外源基因以游離質粒的形式存在于細胞核中，每個細胞可以含有數(shù)百個外源基因拷貝，相比之下，穩(wěn)定轉染的細胞中，外源基因通常以單拷貝或低拷貝數(shù)（1-2個）整合到宿主基因組中；因此，瞬時轉染的高拷貝數(shù)能夠顯著提高基因表達水平。 表達時間差異：瞬時轉染的基因表達是短暫的，通常在轉染后24-96小時內達到高峰，這種短時間內高密度的表達能夠快速積累目標蛋白；而穩(wěn)定轉染的細胞雖然能夠長期表達目標基因，但由于拷貝數(shù)低，表達水平相對較低。
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Q3:傳代次數(shù)是轉染需要重要考慮的因素嗎？
是的，傳代次數(shù)過多會影響細胞的健康狀態(tài)和轉染效率，隨著傳代次數(shù)增加，細胞的基因組和表型可能會發(fā)生變化，導致轉染效果不穩(wěn)定。
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Q4:瞬時轉染和穩(wěn)定轉染之間的主要區(qū)別是什么？
瞬時轉染，外源性基因（DNA/RNA）不整合到宿主細胞的基因組上，其表達是短暫的，通常持續(xù)幾天，并隨著細胞的分裂和增殖而逐漸丟失。但由于外源基因以高拷貝數(shù)存在（通常每個細胞有數(shù)百個拷貝），因此在短時間內可以實現(xiàn)高水平的基因表達。穩(wěn)定轉染，將外源基因整合到宿主細胞基因組中，可以隨著細胞的分裂而穩(wěn)定傳遞至子代細胞，從而實現(xiàn)長期穩(wěn)定的基因表達。需要經過篩選（如抗生素篩選）來獲得穩(wěn)定表達的細胞克隆。但外源基因以單拷貝或低拷貝數(shù)整合到基因組中，因此表達水平相對較低。
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Q5:轉染試劑不小心凍住了，還能繼續(xù)使用嗎？
不建議繼續(xù)使用。
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Q6:使用這款轉染試劑，在孵育24小時后我應該更換培養(yǎng)基嗎？
轉染后不需要除去轉染復合物或更換新鮮培養(yǎng)基。實際操作可根據細胞狀態(tài)，轉染后培養(yǎng)4-6h選擇性更換培養(yǎng)基。
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Q7:細胞毒性大，細胞死了好多，是什么原因?
導致轉染時細胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過大、轉染試劑的用量過大、轉染復合物孵育時間過長、轉染時細胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴格按照所選擇轉染試劑的說明書進行操作，以避免細胞毒性大的問題。
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Q8:轉染復合物出現(xiàn)沉淀，是什么原因？
當轉染試劑和基因的用量都高于說明書用量，或復合物的孵育體系體積小于說明書建議時，由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會導致體系中的復合物出現(xiàn)沉淀。建議嚴格參考說明書的用量進行轉染。
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Q9:轉染效果不穩(wěn)定，不能重現(xiàn)，是什么原因？
轉染效果不穩(wěn)定一般與兩個因素緊密相關，一個是轉染試劑的穩(wěn)定性，另一個是基因的穩(wěn)定性，轉染試劑應按照說明書建議的保存溫度及條件進行保存；如轉染試劑不建議反復凍融，會引起該轉染試劑結構上的變化；基因如短時間內連續(xù)使用，可放置于4℃保存，若超過10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長期儲存以降低核酸的降解速度。此外，每次實驗需要保持細胞密度、生長狀態(tài)、所用試劑以及轉染方法與之前嚴格一致，否則會造成一定的差異。
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Q10:轉染效率低的影響因素有哪些？
影響細胞轉染效率的因素有很多。首先，與所轉染細胞有關，有的細胞容易轉染，如VERO、293T、cos-7等，有的細胞不易轉染，如MCF 7等；其次，與轉染試劑及待轉物的用量和比例有關，在最佳的轉染比例附近可以達到最佳的轉染效果；最后，細胞密度不合適，應根據各種轉染試劑的說明書中推薦的細胞密度進行細胞接種，更有利于提高轉染效率。
識別碼示意圖
