Mergene1000? NIH/3T3細(xì)胞專用DNA轉(zhuǎn)染試劑
英文名稱：Mergene1000® NIH/3T3 Cell-Specific DNA Transfection Reagent
貨號(hào)： 164415
價(jià)格： ￥150 ￥680 ￥1280
產(chǎn)品信息
| 產(chǎn)品簡介 | Mergene1000? NIH/3T3細(xì)胞專用DNA轉(zhuǎn)染試劑是一款高性能、高品質(zhì)的DNA轉(zhuǎn)染試劑，可用于質(zhì)粒DNA的傳送。它具有較強(qiáng)的DNA轉(zhuǎn)染能力，專用于NIH/3T3細(xì)胞，可得到較高轉(zhuǎn)染效率，具有毒性低、穩(wěn)定性好、操作簡單易行、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。 |
| 產(chǎn)品形態(tài) | 液體 |
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 100μL / 0.5mL / 1mL |
| 儲(chǔ)存條件 | 2-8℃ |
| 運(yùn)輸條件 | 常溫 |
| 有效期 | 18個(gè)月 |
| 注意事項(xiàng) |
1. 以上步驟中的細(xì)胞接種量、轉(zhuǎn)染比例是實(shí)驗(yàn)室基于NIH/3T3細(xì)胞摸索的結(jié)果，僅供參考。具體實(shí)驗(yàn)用量可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。 2. 該產(chǎn)品常溫運(yùn)輸，使用時(shí)可分裝保存，避免多次長時(shí)間開蓋。 3. 需自備DMEM高糖培養(yǎng)基，用以稀釋質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑。 4. 轉(zhuǎn)染操作時(shí)，應(yīng)確保細(xì)胞融合度不低于60%，一般維持在60%至70%左右為宜。具體鋪板密度可根據(jù)細(xì)胞的實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。 5. 轉(zhuǎn)染后不需要除去轉(zhuǎn)染復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基。實(shí)際操作可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，轉(zhuǎn)染前或轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)4-6 h選擇更換培養(yǎng)基。 6. 使用高純度的無內(nèi)毒素DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。 7. 初次使用應(yīng)優(yōu)化質(zhì)粒濃度和試劑量以得到最高的轉(zhuǎn)染效率。 8. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科研用途。 9. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套無菌操作。 |
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Q1:轉(zhuǎn)染過程中的培養(yǎng)基可使用抗生素嗎？
在轉(zhuǎn)染過程中，是否可以使用含抗生素的培養(yǎng)基取決于所使用的轉(zhuǎn)染試劑類型和實(shí)驗(yàn)的具體需求。我們的這款轉(zhuǎn)染試劑，可以在培養(yǎng)基中添加抗生素（如青霉素 - 鏈霉素）。我們針對(duì)多種細(xì)胞系開展了實(shí)驗(yàn)，分別在含有抗生素和不含抗生素的培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，比較轉(zhuǎn)染效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，兩種情況下并無顯著差異。然而，對(duì)于某些對(duì)轉(zhuǎn)染過程較為敏感的細(xì)胞類型，或者可能出現(xiàn)細(xì)胞毒性問題的情況，不加抗生素或許有助于改善最終結(jié)果。
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Q2:為什么我的基因在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的表達(dá)水平要高于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染？
基因拷貝數(shù)差異：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染時(shí)，外源基因以游離質(zhì)粒的形式存在于細(xì)胞核中，每個(gè)細(xì)胞可以含有數(shù)百個(gè)外源基因拷貝，相比之下，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，外源基因通常以單拷貝或低拷貝數(shù)（1-2個(gè)）整合到宿主基因組中；因此，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的高拷貝數(shù)能夠顯著提高基因表達(dá)水平。 表達(dá)時(shí)間差異：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的基因表達(dá)是短暫的，通常在轉(zhuǎn)染后24-96小時(shí)內(nèi)達(dá)到高峰，這種短時(shí)間內(nèi)高密度的表達(dá)能夠快速積累目標(biāo)蛋白；而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞雖然能夠長期表達(dá)目標(biāo)基因，但由于拷貝數(shù)低，表達(dá)水平相對(duì)較低。
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Q3:傳代次數(shù)是轉(zhuǎn)染需要重要考慮的因素嗎？
是的，傳代次數(shù)過多會(huì)影響細(xì)胞的健康狀態(tài)和轉(zhuǎn)染效率，隨著傳代次數(shù)增加，細(xì)胞的基因組和表型可能會(huì)發(fā)生變化，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定。
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Q4:瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染之間的主要區(qū)別是什么？
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，外源性基因（DNA/RNA）不整合到宿主細(xì)胞的基因組上，其表達(dá)是短暫的，通常持續(xù)幾天，并隨著細(xì)胞的分裂和增殖而逐漸丟失。但由于外源基因以高拷貝數(shù)存在（通常每個(gè)細(xì)胞有數(shù)百個(gè)拷貝），因此在短時(shí)間內(nèi)可以實(shí)現(xiàn)高水平的基因表達(dá)。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，將外源基因整合到宿主細(xì)胞基因組中，可以隨著細(xì)胞的分裂而穩(wěn)定傳遞至子代細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)長期穩(wěn)定的基因表達(dá)。需要經(jīng)過篩選（如抗生素篩選）來獲得穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞克隆。但外源基因以單拷貝或低拷貝數(shù)整合到基因組中，因此表達(dá)水平相對(duì)較低。
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Q5:轉(zhuǎn)染試劑不小心凍住了，還能繼續(xù)使用嗎？
不建議繼續(xù)使用。
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Q6:使用這款轉(zhuǎn)染試劑，在孵育24小時(shí)后我應(yīng)該更換培養(yǎng)基嗎？
轉(zhuǎn)染后不需要除去轉(zhuǎn)染復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基。實(shí)際操作可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)4-6h選擇性更換培養(yǎng)基。
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Q7:細(xì)胞毒性大，細(xì)胞死了好多，是什么原因?
導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染復(fù)合物孵育時(shí)間過長、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作，以避免細(xì)胞毒性大的問題。
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Q8:轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀，是什么原因？
當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量，或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí)，由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
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Q9:轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，不能重現(xiàn)，是什么原因？
轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān)，一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性，轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存；如轉(zhuǎn)染試劑不建議反復(fù)凍融，會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化；基因如短時(shí)間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存，若超過10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。此外，每次實(shí)驗(yàn)需要保持細(xì)胞密度、生長狀態(tài)、所用試劑以及轉(zhuǎn)染方法與之前嚴(yán)格一致，否則會(huì)造成一定的差異。
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Q10:轉(zhuǎn)染效率低的影響因素有哪些？
影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先，與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān)，有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染，如VERO、293T、cos-7等，有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染，如MCF 7等；其次，與轉(zhuǎn)染試劑及待轉(zhuǎn)物的用量和比例有關(guān)，在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果；最后，細(xì)胞密度不合適，應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種，更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。
識(shí)別碼示意圖
