嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素。

嘌呤霉素的作用機(jī)制為抑制原核和真核核糖體上的肽基轉(zhuǎn)移；Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（PAC），賦予機(jī)體對(duì)嘌呤霉素產(chǎn)生抗性，這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

產(chǎn)品信息

使用說(shuō)明

1. 推薦使用濃度

表1 部分細(xì)胞系的推薦濃度（最佳濃度需要?dú)缜€來(lái)測(cè)定）：

嘌呤霉素有效篩選濃度跟細(xì)胞類型、生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān)。

在穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選中，通常需要事先通過(guò)查閱文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)測(cè)定來(lái)確定能殺死未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的最低的嘌呤霉素濃度，該濃度既可以保障后續(xù)穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選時(shí)添加的嘌呤霉素劑量對(duì)未轉(zhuǎn)染成功細(xì)胞具有足夠的殺傷作用，也可以保障對(duì)已轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞的毒性最小。建議初次做實(shí)驗(yàn)的客戶建立適合自身實(shí)驗(yàn)體系的殺傷曲（kill curve）。

1) Day 1：24孔板內(nèi)以5-8×10⁴ cells/孔的密度鋪板，37℃培養(yǎng)過(guò)夜。

2) Day 2：①準(zhǔn)備含藥培養(yǎng)基：含不同濃度梯度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基（如0-15 μg/mL，至少5個(gè)梯度）；②將各孔換為各梯度含藥培養(yǎng)基，37℃繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。

3) Day 3-6：每48 h更換新鮮的含藥培養(yǎng)基，持續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞，并觀察細(xì)胞存活率。

4) 每日監(jiān)測(cè)細(xì)胞，觀察存活細(xì)胞率，確定加藥開(kāi)始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染細(xì)胞的最低藥物濃度。

3.哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選

  轉(zhuǎn)染抗性基因后，將細(xì)胞在含有篩選抗生素的培養(yǎng)基中持續(xù)培養(yǎng)，殺死非轉(zhuǎn)染細(xì)胞后即可篩選出穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。

1) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后，將細(xì)胞置于含有適當(dāng)濃度篩選抗生素的新鮮培養(yǎng)基中持續(xù)培養(yǎng)。

 注意：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用最明顯。細(xì)胞過(guò)于密集，抗生素殺傷效力會(huì)明顯下降。最好在進(jìn)行細(xì)胞傳代時(shí)，適當(dāng)調(diào)整傳代比例，使其傳代后密度不超過(guò)25%

 2) 每隔48-72 h，更換新鮮的篩選培養(yǎng)基。

3) 篩選開(kāi)始7天后可以對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行鑒定，以確定穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選是否完成。穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選通常需要持續(xù)1-2周或者更多時(shí)間，時(shí)間長(zhǎng)短和宿主細(xì)胞系、轉(zhuǎn)染效率有關(guān)。

4) 篩選完成后，可以根據(jù)需要，進(jìn)行傳代擴(kuò)增、凍存保種。

5) 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株一旦建立成功，在后續(xù)的培養(yǎng)過(guò)程中可以根據(jù)自己的需要持續(xù)添加較低濃度篩選抗生素以保持其純度的穩(wěn)定，通常選擇篩選濃度的50%作為維持濃度。

注意事項(xiàng)

1. 嘌呤霉素為有毒化合物，操作時(shí)請(qǐng)做好相關(guān)防護(hù)。

2. 本產(chǎn)品已經(jīng)過(guò) 0.1 μm過(guò)濾除菌，融化后可直接使用。

3. 使用本產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染。

4. 產(chǎn)品應(yīng)置于2-8℃中解凍，搖勻后使用，不建議反復(fù)凍融。

5. 若解凍后有析出物，可以渦旋混勻或用移液器吹打混勻，室溫靜置1小時(shí)左右或者37℃培養(yǎng)箱放置20-30分鐘后觀察析出物是否可以正常溶解，能溶解則可正常使用。

6. 本產(chǎn)品為濃縮液，請(qǐng)根據(jù)需要稀釋后使用。

7. 常規(guī)2-8℃保藏建議一月內(nèi)使用完畢為宜；長(zhǎng)期不用需-5~-20℃冷凍保藏，不宜室溫或者2-8℃長(zhǎng)期保藏；為避免反復(fù)凍融，用量較少時(shí)建議進(jìn)行分裝后冷凍保藏。

8. 本產(chǎn)品僅用于科研或進(jìn)一步研究使用，不用于診斷和治療。