冷凍保存是保存細(xì)胞的主要方法，對(duì)細(xì)胞的保種、引種、培養(yǎng)以及實(shí)驗(yàn)研究等具有重要意義。在凍存細(xì)胞時(shí)，為使細(xì)胞免受冷凍損傷，常常加入冷凍保護(hù)劑，目前使用最為廣泛的是滲透型保護(hù)劑DMSO（二甲基亞砜），其保護(hù)機(jī)制是在細(xì)胞冷凍懸液完全凝固之前滲透到細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度，降低細(xì)胞內(nèi)外的未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，從而保護(hù)細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷，同時(shí)細(xì)胞內(nèi)的水分也不會(huì)過(guò)分外滲，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮。但DMSO在常溫下對(duì)細(xì)胞毒副作用較大，濃度較大時(shí)對(duì)細(xì)胞毒害作用較大，尤其是敏感的細(xì)胞，如雜交瘤細(xì)胞；一般情況下，DMSO使用終濃度在5%～15%時(shí)具有較好的效果。

武漢普諾賽生產(chǎn)的通用血清型程序凍存液，由DMSO、進(jìn)口胎牛血清（FBS）和DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成，伴隨著普諾賽的發(fā)展，經(jīng)過(guò)數(shù)百種細(xì)胞的驗(yàn)證，適用于各種哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞，傳代細(xì)胞系和雜交瘤細(xì)胞等細(xì)胞的凍存，細(xì)胞存活率高，儲(chǔ)存穩(wěn)定，使用方便。  

產(chǎn)品信息

使用說(shuō)明

細(xì)胞凍存

1、選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（90%左右），并保證在收獲前24h內(nèi)換液一次，收集細(xì)胞，并將細(xì)胞制備成單細(xì)胞懸液（貼壁細(xì)胞可能需要用胰酶消化），計(jì)數(shù)；

2、將細(xì)胞懸液1000r/min離心5min，棄上清；

3、向細(xì)胞沉淀物中加入冷凍液，輕輕吹打，使細(xì)胞密度達(dá)到2~5x10⁶個(gè)/ml；

4、將上述細(xì)胞懸液按0.5ml-1.0ml的量，分裝于無(wú)菌細(xì)胞凍存小管內(nèi)，擰緊管蓋，并做好標(biāo)記；

5、按細(xì)胞凍存程序性降溫步驟凍存細(xì)胞（2-8℃，40min；-20℃，30min-60min；-80℃，過(guò)夜；液氮保存）或使用程序降溫盒降溫后，再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

細(xì)胞復(fù)蘇

1、細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，液氮中取出凍存管后，直接于37℃水浴中完全解凍（勿使水浸沒(méi)凍存管口，而造成污染）；

2、從37℃水浴中取出凍存管，酒精消毒后，吸出細(xì)胞懸液于10倍體積的培養(yǎng)液中，1000r/min離心5min，棄上清；

3、加入含血清的培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1、使用本產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染；

2、2-8℃中解凍，搖勻后使用，請(qǐng)勿反復(fù)凍融，用量較少時(shí)建議分裝凍存；

3、不宜長(zhǎng)時(shí)間放置于室溫環(huán)境中，初次融化后可在2-8℃避光保存至少一個(gè)月；

4、使用時(shí)如有少量蛋白析出，可以直接使用，不會(huì)影響凍存效果，也可離心去沉淀后使用；

5、凍存后的細(xì)胞請(qǐng)勿在-80℃保存超過(guò)一個(gè)月，長(zhǎng)期保存應(yīng)放置于液氮中；

6、凍存細(xì)胞時(shí)，請(qǐng)將細(xì)胞凍存管管蓋擰緊，以免液氮內(nèi)滲，而導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)發(fā)生凍存管炸裂危險(xiǎn)；

7、因本品中含有DMSO，使用時(shí)請(qǐng)做好防護(hù)措施，避免與皮膚直接接觸；

8、本產(chǎn)品僅用于科研或進(jìn)一步研究使用，不用于診斷和治療。