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細(xì)胞學(xué)堂 | C2C12細(xì)胞培養(yǎng)攻略,C2C12細(xì)胞誘導(dǎo)分化步驟
來源：Pricella 瀏覽量： 發(fā)布時(shí)間：2022-06-20 13:59:35
C2C12 (小鼠成肌細(xì)胞)是由D·Yaffe和O·Saxel建立的小鼠成肌細(xì)胞株的亞克隆。C2C12細(xì)胞分化很快，容易形成可伸縮的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)處理C2C12細(xì)胞，會(huì)導(dǎo)致C2C12細(xì)胞的分化途徑從成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)換為成骨細(xì)胞。
C2C12作為研究肌肉理想的細(xì)胞模型，在實(shí)驗(yàn)研究中常誘導(dǎo)其分化為多核肌管。成肌分化在肌肉再生中起重要作用，它是通過一種高度協(xié)調(diào)的序列程序來產(chǎn)生成熟的骨骼肌的過程。
基礎(chǔ)信息
C2C12細(xì)胞狀態(tài)直接影響著分化潛力，要想細(xì)胞分化做得好，首先要在培養(yǎng)上下功夫。該細(xì)胞的換液和傳代步驟，參照其他貼壁細(xì)胞進(jìn)行操作即可。除此之外，還有以下三點(diǎn)，需要留意：
1
該細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，容易分化，建議密度達(dá)70%時(shí)傳代；
2
不要讓細(xì)胞長(zhǎng)得太滿甚至開始融合，影響后續(xù)成肌分化率；
3
細(xì)胞消化完全后再吹打混勻，不要用槍頭把沒有消化好的細(xì)胞吹下來，以免細(xì)胞成團(tuán)。
待C2C12細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度為80%左右時(shí)，即可進(jìn)行誘導(dǎo)分化。具體步驟如下:
01
丟棄舊培養(yǎng)基，用PBS清洗兩次；
02
換分化培養(yǎng)基（高糖DMEM+2%~6%馬血清+1% P/S）誘導(dǎo)，然后置于CO2恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；
備注：由于馬血清品質(zhì)不同，建議馬血清做2%、4%、6%梯度測(cè)試，以確定最佳濃度。
03
每24h換液一次，在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)狀況。誘導(dǎo)分化成功時(shí)，可以看見肌管表現(xiàn)為厚的管狀結(jié)構(gòu)，有時(shí)為多核。
圖2. C2C12細(xì)胞分化
參考文獻(xiàn)
注：部分圖片來源于網(wǎng)絡(luò)
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