提取原代細(xì)胞，用巨噬細(xì)胞集落刺激因子( M-CSF），和核因子KB 受體活化因子配體( RANKL )誘導(dǎo)。

可使用25μg/L M-CSF+50μg/L RANKL的α-MEM完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)，隔3天換液一次，培養(yǎng)至第5天開(kāi)始出現(xiàn)體積較大的破骨細(xì)胞。

誘導(dǎo)試劑：可以用LPS誘導(dǎo)，RANKL誘導(dǎo)，或者M(jìn)-CSF+ RANKL誘導(dǎo)。

1. LPS誘導(dǎo)：10ng/mL、30ng/mL、50ng/mL、100ng/mL LPS均能誘導(dǎo)，但30、50、100ng/mL LPS誘導(dǎo)的多核細(xì)胞數(shù)量更多，且30ng/mL LPS誘導(dǎo)的多核細(xì)胞大小明顯增加。

圖2. 不同濃度LPS誘導(dǎo)破骨

2. RANKL誘導(dǎo)：用含100μg/L RANKL的α-MEM完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)，隔天換液一次，誘導(dǎo)培養(yǎng)至第4~5天出現(xiàn)大量多核細(xì)胞。

3. M-CSF+ RANKL誘導(dǎo): 使用100 ng /mL RANKL 與 100 ng /mL M-CSF的DMEM完全培養(yǎng)基，每?jī)商旄屡囵B(yǎng)液一次，第4天左右開(kāi)始出現(xiàn)破骨細(xì)胞。

原代細(xì)胞誘導(dǎo)形成的成熟破骨細(xì)胞數(shù)量及純度有限，但骨吸收活性強(qiáng)；RAW264.7細(xì)胞系誘導(dǎo)產(chǎn)生的破骨細(xì)胞數(shù)量多純度高，但吸收活性弱；

如果培養(yǎng)時(shí)，鏡下較多細(xì)胞出現(xiàn)偽足時(shí)，細(xì)胞整體狀態(tài)可能不好，這時(shí)的細(xì)胞不適合用于誘導(dǎo)破骨；

RAW264.7細(xì)胞的傳代次數(shù)對(duì)其能否誘導(dǎo)成破骨細(xì)胞至關(guān)重要，代數(shù)越低，細(xì)胞的分化能力越高；

原代細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)形成的破骨細(xì)胞周期長(zhǎng)，一般在9-10天時(shí)才達(dá)到最佳狀態(tài)；RAW 264.7誘導(dǎo)培養(yǎng)的周期稍短，一般在第5~6天時(shí)出現(xiàn)大量破骨細(xì)胞；

除了TRAP染色鑒定破骨細(xì)胞，通過(guò)觀察細(xì)胞核的數(shù)量以及降鈣素受體染色和觀察骨（牙）片吸收陷窩，可以進(jìn)一步鑒定破骨細(xì)胞是否具有骨吸收能力。

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