技術(shù)支持Technical Support

聯(lián)系我們CONTACT US

400-999-210024小時(shí)服務(wù)熱線(xiàn)
sales@procell.com.cn銷(xiāo)售郵箱

細(xì)胞學(xué)堂 | 如何用PCR法進(jìn)行細(xì)胞種屬鑒定

來(lái)源：Pricella　　瀏覽量：　　發(fā)布時(shí)間：2022-08-23 14:00:14

體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞是目前醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用最為廣泛、最重要的實(shí)驗(yàn)工具之一，確定細(xì)胞來(lái)源的可靠性以及培養(yǎng)過(guò)程中是否存在不同種屬間細(xì)胞的交叉污染，對(duì)于實(shí)驗(yàn)成功至關(guān)重要。

如果是人源細(xì)胞系，并且有文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫(kù)公布對(duì)應(yīng)細(xì)胞位點(diǎn)信息，即可進(jìn)行STR鑒定；如果是非人源的細(xì)胞系，可以進(jìn)行種屬鑒定，種屬鑒定結(jié)果判定一般包含兩項(xiàng)：是否為單一種屬來(lái)源細(xì)胞以及來(lái)源細(xì)胞種屬，除了必要的種屬鑒定外，在使用細(xì)胞之前也可針對(duì)自身需求對(duì)細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)細(xì)胞特性的鑒定，如免疫熒光或流式檢測(cè)等。部分小鼠細(xì)胞也可以做STR鑒定，但目前國(guó)際上現(xiàn)有的數(shù)據(jù)庫(kù)不完全，很多都沒(méi)有匹配數(shù)據(jù)。

目前常見(jiàn)的細(xì)胞種屬鑒定方法有染色體分析、同工酶分析、DNA條碼測(cè)序及PCR法等。這幾種方法中，最常用、最普遍的為PCR法。下面，普諾賽為大家詳細(xì)介紹PCR法。

方法一

提取細(xì)胞DNA，利用種屬特異性引物序列對(duì)細(xì)胞DNA進(jìn)行擴(kuò)增，之后用電泳檢測(cè)，分析確定細(xì)胞種屬及是否存在不同種屬細(xì)胞交叉污染。

一般來(lái)說(shuō)，引物有很好的特異性時(shí)，各引物對(duì)僅對(duì)同源物種的細(xì)胞DNA擴(kuò)增出目的條帶，而對(duì)其他種屬細(xì)胞的DNA無(wú)擴(kuò)增條帶；但種屬特異性引物序列不是很強(qiáng)時(shí)，電泳圖中就有可能出現(xiàn)雜帶，所以檢測(cè)時(shí)應(yīng)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，排除非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的干擾。若在其他泳道出現(xiàn)了對(duì)應(yīng)于其他種屬的目的條帶，應(yīng)考慮細(xì)胞出現(xiàn)了交叉污染。

圖1. 擴(kuò)增結(jié)果顯示樣品為小鼠基因，中國(guó)倉(cāng)鼠有非特異性條帶擴(kuò)增（雜帶）

方法二

提取細(xì)胞DNA，用種屬熒光復(fù)合引物MIX對(duì)動(dòng)物線(xiàn)粒體COI基因進(jìn)行擴(kuò)增，然后用遺傳分析儀對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)和分析。

這種方法主要通過(guò)對(duì)應(yīng)位置出峰來(lái)判斷是否為該種屬。需要注意的是，10-18S位點(diǎn)必須出峰，若未出峰，則表明擴(kuò)增失敗。若細(xì)胞出現(xiàn)多峰，則表明為該細(xì)胞存在交叉污染。

種屬?gòu)?fù)合擴(kuò)增MIX表
1-MO	小鼠	11-SS	豬
2-AF	綠猴	13-OA	綿羊
3-OR	穴兔	14-CF	狗
4-RA	大鼠	16-bt	牛
5-HO	人	19-CR	中國(guó)倉(cāng)鼠
10-18S	18S內(nèi)參