MTT貼壁細(xì)胞要預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)以上嗎？

MTT檢測(cè)中，貼壁細(xì)胞需要根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度來(lái)看細(xì)胞接種時(shí)間，細(xì)胞在對(duì)數(shù)期的時(shí)候可以進(jìn)行干預(yù)刺激。

怎么確定EdU的孵育時(shí)間？

EdU孵育時(shí)間由細(xì)胞周期決定，一般是細(xì)胞周期的1/10-1/5，大部分細(xì)胞系可采用孵育2小時(shí)的方式，也可以參考有些EdU增殖檢測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)中推薦的細(xì)胞孵育時(shí)間。

請(qǐng)問(wèn)不更換培養(yǎng)基加CCK-8，有沒(méi)有影響？

可以不更換培養(yǎng)基加CCK-8，不過(guò)加之前最好要觀察一下細(xì)胞的狀態(tài)以及密度。

原代培養(yǎng)干細(xì)胞的時(shí)候，怎么判斷細(xì)胞狀態(tài)是在增殖還是誘導(dǎo)成其他細(xì)胞了呢？

原代細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞狀態(tài)的判斷，需要結(jié)合細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞的生長(zhǎng)速度、細(xì)胞純度等來(lái)判斷。判斷增殖最簡(jiǎn)單的方法，是看細(xì)胞的數(shù)量是否增加，至于細(xì)胞是否誘導(dǎo)成其他細(xì)胞，這個(gè)需要通過(guò)鑒定，來(lái)判斷是否變成其他細(xì)胞，或者變成其他細(xì)胞的比例。

毒性或者抑制OD不都是下降的嗎？毒性下降的更明顯嗎？

具體要看檢測(cè)的方法。如果是MTT或者CCK-8等通過(guò)檢測(cè)活細(xì)胞來(lái)反映毒性的，OD值與對(duì)照組比，值下降，說(shuō)明細(xì)胞活力越低，毒性越大或者抑制增殖；如果是檢測(cè)死細(xì)胞來(lái)反映毒性的，OD值越低，說(shuō)明死細(xì)胞越少，毒性越小。

怎么檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的毒性作用還是過(guò)表達(dá)了基因的抑制作用？

EdU孵育時(shí)間由細(xì)胞周期決定，一般是細(xì)胞周期的1/10-1/5，大部分細(xì)胞系可采用孵育2小時(shí)的方式，也可以參考有些EdU增殖檢測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)中推薦的細(xì)胞孵育時(shí)間。

OD值一般范圍多少比較好？

一般是在0.1-2.0之間，最好在1.0附近。

克隆培養(yǎng)期間需要換液?jiǎn)?

可以進(jìn)行1-2次換液，注意換液前預(yù)溫培養(yǎng)基，沿壁加液。

3厘米的培養(yǎng)皿可以放多少培養(yǎng)基?。?/strong>

建議加3毫升左右。

過(guò)期一年的1640培養(yǎng)基還能用嗎？

建議不要使用，如果是基礎(chǔ)培養(yǎng)基，覺(jué)得扔掉比較可惜，可以當(dāng)作PBS來(lái)使用，但要注意保持無(wú)菌。

室溫放置了三天的培養(yǎng)基還能用嗎？

培養(yǎng)基一般是4℃存放，放室溫3天，需要觀察下培養(yǎng)基顏色，有無(wú)渾濁、沉淀和絮狀物，如果是培養(yǎng)液中添加了一些特殊因子，需要考慮添加因子的穩(wěn)定性，如果沒(méi)有以上異常情況，可以使用。

胰蛋白酶冷消化組織后，都是黏液組織，離心也沒(méi)辦法，怎么把黏液組織轉(zhuǎn)移到新的管子里再進(jìn)行二次消化呢？

如果是胰酶消化的時(shí)候出現(xiàn)粘液組織或者組織呈果凍狀，可能是組織中細(xì)胞損傷大，釋放的DNA膠體包裹細(xì)胞碎片。建議觀察是不是消化液的體積較少，可以用低濃度的胰酶或者消化作用更溫和的膠原酶消化，同時(shí)也可以加Dnase I。

人成纖維細(xì)胞很難消化，每次都不能完全消化下來(lái)，有什么辦法可以解決？

細(xì)胞難消化，與消化用的胰酶濃度、胰酶溫度、胰酶是否充分浸潤(rùn)、胰酶是否含EDTA、培養(yǎng)瓶是否包被等因素有關(guān)，建議從以上方面進(jìn)行調(diào)整。