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細(xì)胞學(xué)堂 | 直擊細(xì)胞培養(yǎng)試劑四大疑難問題
來源:Pricella 瀏覽量: 發(fā)布時(shí)間:2022-09-16 13:32:19
試劑是培養(yǎng)細(xì)胞必不可少的“裝備”,在使用這些試劑的過程中,總會(huì)遇到各種各樣的問題?;诖?,普諾賽將試劑的常見問題及解決方法總結(jié)如下。
1
10瓶雙抗同時(shí)在-20℃的條件下凍存,9瓶?jī)錾狭耍?瓶卻沒凍上
原因
可能是過冷現(xiàn)象。因?yàn)樗泻性S多的鹽類物質(zhì),在標(biāo)準(zhǔn)狀況下,水的結(jié)冰點(diǎn)是0℃,但因?yàn)辂}類物質(zhì)即使0℃以下也不能結(jié)冰,這就是過冷現(xiàn)象。由于水里面比較純凈,在不震蕩的情況下,即使稍微低于零度,也不會(huì)馬上結(jié)冰。
解決方法
雙抗拿出來的時(shí)候由于震蕩,使水的穩(wěn)定狀態(tài)改變,會(huì)很快結(jié)冰;產(chǎn)品打開時(shí),由于溫差,水極度放熱,溫度極劇下降,也容易導(dǎo)致結(jié)冰。
2
MEM培養(yǎng)基高壓滅菌后底部出現(xiàn)沉淀
原因
高溫高壓條件會(huì)讓內(nèi)部的鹽溶液和一些氨基酸、維生素等發(fā)生化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生沉淀。
解決方法
1.細(xì)胞培養(yǎng)用培養(yǎng)基不可高壓滅菌,0.22μm過濾除菌即可。
2.已產(chǎn)生沉淀的培養(yǎng)基不建議繼續(xù)使用。
注意事項(xiàng)
1. 細(xì)胞培養(yǎng)試劑一定要按照說明書要求選擇最佳的培養(yǎng)基儲(chǔ)存和操作方法;
2. 避免高溫儲(chǔ)藏和凍融。
圖1. 培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀
3
含酚紅的胰酶冷凍后變黃
原因
由于該胰酶溶液的溶劑是PBS,為磷酸鹽緩沖體系,在冷凍后會(huì)變成淺黃色。同時(shí)若該產(chǎn)品采用的是干冰運(yùn)輸方式,在運(yùn)輸過程中少量CO2可能會(huì)進(jìn)入到溶液中導(dǎo)致PH值略微下降。
解決方法
該種淺黃色的胰酶溶解后依然會(huì)變成橙紅色液體,可以正常使用;若完全溶解后還是黃色可以聯(lián)系廠家更換。
圖2. 胰酶冷凍后變黃
注意事項(xiàng)
1. 由于不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣,操作時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況,確定最佳消化時(shí)間;
2. 消化時(shí)間需適宜,過長(zhǎng)或者過短都會(huì)影響細(xì)胞貼壁和生長(zhǎng)狀況;
3. 不宜長(zhǎng)時(shí)間放置于室溫環(huán)境或在4℃條件下長(zhǎng)期保存;
4. 在2℃-8℃條件下解凍,搖勻后使用,切忌反復(fù)凍融,用量較少時(shí)建議分裝凍存。
4
L-谷氨酰胺溶液溶解后析出
原因
在2℃-8℃的條件下解凍后,溶液變成乳液狀屬正?,F(xiàn)象,該情況系L-谷氨酰胺受溫度影響導(dǎo)致溶解度降低而析出。
解決方法
將該溶液表面用75%酒精擦拭搖勻后放入37℃培養(yǎng)箱,30-40分鐘后溶液可以溶解至澄清透明,最后搖勻使用,使用過程中切忌反復(fù)凍融,用量較少時(shí)建議分裝凍存。
圖3. L-谷氨酰胺溶液溶解后析出
注意事項(xiàng)
1. 不宜長(zhǎng)時(shí)間放置于室溫環(huán)境或在4℃條件下長(zhǎng)期保存;
2. 根據(jù)需要稀釋后使用。