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Annexin V實驗對照設置
來源：Pricella 瀏覽量： 發(fā)布時間：2023-03-13 17:18:15
Annexin V是常用的檢測細胞凋亡的方法，一般通過流式細胞儀來檢測。為保證實驗結果的準確性，方便后續(xù)數(shù)據(jù)分析，通常需要設置不同對照實驗組。
①樣本不帶自發(fā)熒光：
組別 | Annexin V | 核染料 | 樣本類型 |
空白對照 | - | - | 不做任何處理的細胞 |
生物學對照 | + | + | 不做任何處理的細胞 |
單陽對照1 | + | - | 有明顯凋亡的細胞 |
單陽對照2 | - | + | 有明顯凋亡的細胞 |
實驗組 | + | + | 實驗組細胞 |
②樣本帶自發(fā)熒光
組別 | Annexin V | 核染料 | 樣本類型 |
空白對照 | - | - | 不做任何處理無自發(fā)熒光的細胞 |
生物學對照 | + | + | 不做任何處理的細胞 |
單陽對照1 | + | - | 無自發(fā)熒光有明顯凋亡的細胞 |
單陽對照2 | - | + | 無自發(fā)熒光有明顯凋亡的細胞 |
單陽對照3 | - | - | 帶自發(fā)熒光的細胞 |
實驗組 | + | + | 實驗組細胞 |
空白對照：調節(jié)閾值和儀器電壓。
生物學對照：排除實驗操作對實驗結果的影響，扣除熒光背景，同時還可以作為實驗組劃門的依據(jù)。
單陽對照：調節(jié)補償，同時也可以輔助調節(jié)該通道的電壓，防止信號超出儀器接受范圍。
注意事項：
*單陽對照組細胞一定要用明顯有凋亡的細胞，因為調節(jié)補償需要有足夠的陽性信號
*樣本帶自發(fā)熒光需要設置三管單陽對照，確保每一管都只有一種熒光
實驗組：檢測實驗結果。
Tips：
樣本為貼壁細胞：
*細胞培養(yǎng)基中漂浮的細胞需要收集，與后續(xù)收集的貼壁細胞一起檢測
*避免人為操作帶來的細胞損傷，如：胰酶消化時間要適宜，消化貼壁細胞時操作要輕柔等
*盡量不使用含EDTA的胰酶，因為EDTA會影響Annexin V與PS的結合。如果一定要用含EDTA的胰酶，終止消化后要將細胞洗滌干凈，盡量去除EDTA
*細胞比較難消化時可以分批次進行消化，避免先消化下來的細胞被過度消化導致假陽性結果
