Mergene1000^?Hela細(xì)胞專用DNA轉(zhuǎn)染試劑是一款性能優(yōu)良的DNA轉(zhuǎn)染試劑，可用于質(zhì)粒DNA的傳送。它具有較強的DNA轉(zhuǎn)染能力，專用于Hela細(xì)胞，可得到較高轉(zhuǎn)染效率，具有毒性低、穩(wěn)定性好、操作簡單易行、重復(fù)性好等優(yōu)點。

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡易操作流程圖

產(chǎn)品使用步驟

以24孔板為例，Mergene1000^? Hela細(xì)胞專用DNA轉(zhuǎn)染試劑（μL）與質(zhì)粒DNA（μg）按照2:1比例混合，可根據(jù)情況在1:1到5:1的比例之間調(diào)整。其它規(guī)格培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿可參考表1的轉(zhuǎn)染推薦量。

 l細(xì)胞鋪板

轉(zhuǎn)染前一天，每孔加入500 μL MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/S完全培養(yǎng)基，接種0.8×10⁵-1.0×10⁵個細(xì)胞/孔，細(xì)胞培養(yǎng)12 h，可針對細(xì)胞實際狀態(tài)適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)時間，使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度達(dá)到60%-70%的融合度。

l轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備

1.  準(zhǔn)備2個無菌離心管，取一管加入0.4 μg質(zhì)粒和MEM（含NEAA）基礎(chǔ)培養(yǎng)基，終體積為10 μL，輕輕吹打混勻；另一管加入0.8 μL Mergene1000^? Hela細(xì)胞專用DNA轉(zhuǎn)染試劑和9.2 μL MEM（含NEAA）基礎(chǔ)培養(yǎng)基，終體積為10 μL，吹打混勻后室溫孵育5 min。（以上是針對每孔細(xì)胞的制備量，請根據(jù)您的具體實驗條件和需求，計算實驗所需的制備量。）

2.  將上述兩管等體積稀釋液混合，輕輕吹打混勻，室溫靜置20 min。

l細(xì)胞轉(zhuǎn)染

1.  將制備的20 μL復(fù)合物逐滴加到細(xì)胞中，采用8字法混勻細(xì)胞培養(yǎng)板，放置37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2.   培養(yǎng)18-48 h后檢測基因表達(dá)。

               表1   Hela細(xì)胞不同培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染參考用量

【注】該表使用量僅供參考，DNA與Mergene1000^?Hela細(xì)胞專用DNA轉(zhuǎn)染試劑具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞狀況及其他實驗條件進(jìn)行優(yōu)化。

四、注意事項

1.以上步驟中的細(xì)胞接種量、轉(zhuǎn)染比例是實驗室基于Hela細(xì)胞摸索的結(jié)果，僅供參考。具體實驗用量可根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)整。

2. 該產(chǎn)品常溫運輸，使用時可分裝保存，避免多次長時間開蓋。

3. 需自備MEM（含NEAA）基礎(chǔ)培養(yǎng)基，用以稀釋質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑。

4. 轉(zhuǎn)染操作時，應(yīng)確保細(xì)胞融合度不低于60%，一般維持在60%至70%左右為宜。具體鋪板密度可根據(jù)細(xì)胞的實際情況進(jìn)行調(diào)整。

5. 轉(zhuǎn)染后不需要除去轉(zhuǎn)染復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基。實際操作可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)4-6 h選擇更換培養(yǎng)基。

6. 使用高純度的無內(nèi)毒素DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。

7. 初次使用應(yīng)優(yōu)化質(zhì)粒濃度和試劑量以得到最高的轉(zhuǎn)染效率。

8. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科研用途。

9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套無菌操作。

五、實驗結(jié)果展示（僅供參考）

圖1. Mergene1000^? Hela細(xì)胞專用DNA轉(zhuǎn)染試劑用EGFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞的實拍明場和熒光照片。

圖2. Mergene1000^? Hela細(xì)胞專用DNA轉(zhuǎn)染試劑用EGFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。

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