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細(xì)胞學(xué)堂 | Advanced培養(yǎng)基:更優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)選擇

來(lái)源:Pricella  瀏覽量:  發(fā)布時(shí)間:2024-10-25 15:00:00

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,培養(yǎng)基的重要性不言而喻。它不僅是細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的物質(zhì)基礎(chǔ),還直接影響著細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)、表型、功能以及實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),通常會(huì)添加10%的血清,然而,這種做法伴隨著成本高、批次間差異大以及潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)等問(wèn)題。

為了解決這些難題,普諾賽通過(guò)優(yōu)化經(jīng)典的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方,成功開(kāi)發(fā)出Advanced系列培養(yǎng)基,包括Advanced RPMI-1640、Advanced DMEM、Advanced DMEM/F12及Advanced MEM四款產(chǎn)品。Advanced培養(yǎng)基能夠有效減少血清使用量,提供更穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境。

本文將詳細(xì)介紹Advanced培養(yǎng)基的優(yōu)勢(shì)、細(xì)胞適應(yīng)和在使用中的注意事項(xiàng),幫助您更好地了解和使用這一類培養(yǎng)基。


01

Advanced培養(yǎng)基優(yōu)勢(shì)

減少血清依賴,降低實(shí)驗(yàn)變異性

血清在傳統(tǒng)培養(yǎng)基中的主要作用是為細(xì)胞提供必要的營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子,但由于血清成分復(fù)雜且存在批次間差異,可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的波動(dòng)性。Advanced培養(yǎng)基通過(guò)減少血清的使用量,有效降低了這些變異性,提高了實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和一致性。

可直接替代基礎(chǔ)培養(yǎng)基

用Advanced培養(yǎng)基替換基礎(chǔ)培養(yǎng)基,僅需添加L-丙氨酰-L-谷氨酰胺或L-谷氨酰胺以及減少添加量血清,即可制備完全培養(yǎng)基。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系,無(wú)需馴化或經(jīng)間接適應(yīng)過(guò)程,即可將培養(yǎng)基中的血清用量減少至少50%。

減少血清使用量而不影響細(xì)胞生長(zhǎng)性能

Advanced培養(yǎng)基成分經(jīng)過(guò)優(yōu)化后,能夠?yàn)榧?xì)胞提供更合適的生長(zhǎng)環(huán)境,減少不必要的成分干擾。與經(jīng)典完全培養(yǎng)基(含10%血清)相比,多種細(xì)胞在Advanced培養(yǎng)基中減血清(含2-5%血清,甚至更低)培養(yǎng),表現(xiàn)出相同甚至更優(yōu)的增殖效果,且細(xì)胞形態(tài)不發(fā)生顯著變化。





02

細(xì)胞適應(yīng)

更換培養(yǎng)基時(shí)進(jìn)行細(xì)胞適應(yīng)測(cè)試是為了減少細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng),使其逐漸適應(yīng)新的環(huán)境,避免突然變化培養(yǎng)條件導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)變慢甚至死亡。

對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系,在使用Advanced培養(yǎng)基時(shí)無(wú)需適應(yīng),可直接降低50%血清用量而不影響細(xì)胞狀態(tài)(參考直接適應(yīng)的方法)。

如果觀察到細(xì)胞生長(zhǎng)速度變慢、形態(tài)改變、次級(jí)代謝物產(chǎn)生水平不理想或需要進(jìn)一步降低血清濃度時(shí),則需采取一定的方法使之逐漸適應(yīng)低血清環(huán)境(參考間接適應(yīng)的方法)。


直接適應(yīng)

直接使用降低50%胎牛血清的Advanced培養(yǎng)基,替換原有的完全培養(yǎng)基,按照常規(guī)培養(yǎng)方法換液和傳代培養(yǎng);

細(xì)胞能夠持續(xù)增長(zhǎng)維持3代以上,即認(rèn)為已經(jīng)適應(yīng)新培養(yǎng)基。

間接適應(yīng)


按照Advanced完培:原配方完培=25:75的比例混合新舊培養(yǎng)基,用于培養(yǎng)細(xì)胞;

監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)和傳代培養(yǎng),逐步增加新培養(yǎng)基的比例,直至全部更換為Advanced完培,參考25:75 → 50:50 → 75:25 → 90:10 → 100:0的順序(每個(gè)步驟可能需要多次重復(fù),直至細(xì)胞完全適應(yīng)新的減血清培養(yǎng)基);

在100%的Advanced完全培養(yǎng)基中細(xì)胞持續(xù)增長(zhǎng)3代以上,即認(rèn)為已適應(yīng)新培養(yǎng)基。

無(wú)需適應(yīng)


經(jīng)過(guò)驗(yàn)證,使用普諾賽?Advanced系列培養(yǎng)基時(shí),以下細(xì)胞系無(wú)需間接適應(yīng)步驟,即可直接培養(yǎng):

使用Advanced RPMI-1640:

Vero、Raji、Daudi、Jurkat, Clone E6-1、THP-1、4T1、CT26.WT、PC-12 (High differentiation)、22RV1、BxPC-3、B16-F10

使用Advanced DMEM:

Vero、COS-7、A549、3T3-L1、HuH-7、MDA-MB-231、SW620、NRK-52E、A-673、C2C12、RH-35、Ishikawa、CHL

使用Advanced DMEM/F12:

Vero、LX-2、KGN、C8-D1A、Hela、NIH-3T3、KLE、ARPE-19、4T1、NIH-3T3、JHH-7、NCI-H2009

使用Advanced MEM:

Vero、HK-2、Hep G2、Caco-2、NCTC Clone 929、Hela、U-87 MG、HMC3、PK-15




03

Advanced培養(yǎng)基使用注意事項(xiàng)


01

并非所有的細(xì)胞都適合使用Advanced培養(yǎng)基減血清培養(yǎng),嘗試減血清培養(yǎng)前,務(wù)必先用少量細(xì)胞測(cè)試使用效果,確保減血清對(duì)細(xì)胞狀態(tài)無(wú)影響后再進(jìn)行大量替換。


02

Advanced培養(yǎng)基中特別添加了乙醇胺、谷胱甘肽等成分,以減少血清的使用量。通常情況下,細(xì)胞可減少原完全培養(yǎng)基至少一半的血清用量,如想進(jìn)一步減少血清用量(如低至0.5-2%),需針對(duì)每種細(xì)胞系進(jìn)行更低水平血清培養(yǎng)適應(yīng),以實(shí)現(xiàn)更大幅度的血清減少。


03

使用Advanced培養(yǎng)基雖能實(shí)現(xiàn)血清用量的減少,但對(duì)于血清品質(zhì)的要求并未降低,建議使用高品質(zhì)的胎牛血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。


04

在細(xì)胞進(jìn)行Advanced培養(yǎng)基減血清培養(yǎng)適應(yīng)前,請(qǐng)確保細(xì)胞狀態(tài)良好。如更換培養(yǎng)基前存在細(xì)胞狀態(tài)差甚至有不易察覺(jué)污染的情況(如支原體或黑膠蟲(chóng)污染),則細(xì)胞適應(yīng)Advanced培養(yǎng)基減血清培養(yǎng)的成功率將大幅降低。





產(chǎn)品推薦

(點(diǎn)擊圖片了解更多產(chǎn)品信息)

Advanced RPMI-1640


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PM153110

Advanced DMEM/F12


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PM153312

Advanced DMEM


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PM153210

Advanced MEM


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PM153410




以上是關(guān)于Advanced培養(yǎng)基的優(yōu)勢(shì)、細(xì)胞適應(yīng)和使用中注意事項(xiàng)的介紹,更多細(xì)胞培養(yǎng)干貨,請(qǐng)持續(xù)關(guān)注細(xì)胞學(xué)堂專欄~

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