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細(xì)胞學(xué)堂 | 如何提高THP-1轉(zhuǎn)染效率？
來(lái)源：Pricella 瀏覽量： 發(fā)布時(shí)間：2022-11-22 09:59:20
THP-1細(xì)胞因其特性，本身就很難轉(zhuǎn)染，所以轉(zhuǎn)染效率普遍偏低。但轉(zhuǎn)染效率太低容易影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，那么我們可以如何提高轉(zhuǎn)染效率呢？
目前實(shí)驗(yàn)中THP-1轉(zhuǎn)染使用較多的方法是：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、腺病毒轉(zhuǎn)染、慢病毒轉(zhuǎn)染，其中病毒轉(zhuǎn)染效率相較脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染要高一些，但操作更繁瑣、成本也更高。
脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染成本低廉，但細(xì)胞毒性較大，細(xì)胞死亡率較高；
腺病毒轉(zhuǎn)染可在對(duì)細(xì)胞損傷較小的情況下達(dá)較高水平，但可能對(duì)細(xì)胞免疫狀態(tài)影響大；
慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞毒性低，但其病毒產(chǎn)量低，實(shí)驗(yàn)消耗病毒量大。
三種方法各有優(yōu)劣，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的轉(zhuǎn)染方法。
在開(kāi)始轉(zhuǎn)染前，很多老師會(huì)困惑，THP-1究竟先誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞再轉(zhuǎn)染還是先轉(zhuǎn)染再誘導(dǎo)呢？
其實(shí)，這兩種方法都是可以的，主要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩?lái)選擇。不過(guò)THP-1誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞后，不能繼續(xù)傳代增殖，所以如果需要大量細(xì)胞時(shí)，最好提前大量接種，然后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
但需要注意的是，無(wú)論采用哪種轉(zhuǎn)染方法都會(huì)引起部分細(xì)胞死亡，因此培養(yǎng)時(shí)需要時(shí)刻注意THP-1細(xì)胞狀態(tài)，誘導(dǎo)或轉(zhuǎn)染時(shí)，最好使用處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞。
不論選擇哪種方法，在進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，我們都需要根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多，從細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，到轉(zhuǎn)染方法的操作細(xì)節(jié)，都需要考慮。以下注意事項(xiàng)可為大家在實(shí)驗(yàn)遇到難題時(shí)，快速進(jìn)行問(wèn)題排查：
1
轉(zhuǎn)染效率受轉(zhuǎn)染質(zhì)粒本身效果影響。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染宜使用超螺旋DNA；在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染中，細(xì)胞對(duì)線性DNA的攝取水平低于超螺旋DNA，但它將DNA整合至宿主基因組中的效果更好；
2
一般培養(yǎng)基中加入血清會(huì)促進(jìn)DNA的轉(zhuǎn)染。但脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染RNA時(shí)，最好在無(wú)血清的情況下進(jìn)行；
3
在轉(zhuǎn)染之前更換培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)染效率，所用培養(yǎng)基可37℃預(yù)溫；
4
脂質(zhì)體/ DNA混合物應(yīng)當(dāng)逐滴加入，盡可能保持一致，從培養(yǎng)皿一邊到另一邊，邊加入邊輕搖培養(yǎng)皿，以確保均勻分布和避免局部高濃度，嚴(yán)格控制時(shí)間；
5
抗生素也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率，特別是使用脂質(zhì)體試劑時(shí)，會(huì)引起細(xì)胞毒性從而使轉(zhuǎn)染效率降低。若接種時(shí)未添加抗生素，則轉(zhuǎn)染前可不用更換培養(yǎng)基；
6
對(duì)于不同的細(xì)胞培養(yǎng)板，脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑、DNA、細(xì)胞和培養(yǎng)基的使用量會(huì)有所不同。
參考文獻(xiàn)
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