當(dāng)前位置：首頁 >> 技術(shù)支持 >> 實(shí)驗(yàn)指南 >> 詳細(xì)內(nèi)容

技術(shù)支持Technical Support

聯(lián)系我們CONTACT US

400-999-210024小時(shí)服務(wù)熱線
sales@procell.com.cn銷售郵箱

細(xì)胞學(xué)堂 | RAW 264.7誘導(dǎo)極化及鑒定大全

來源：Pricella　　瀏覽量：　　發(fā)布時(shí)間：2022-12-23 14:49:00

RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）是破骨細(xì)胞、炎癥研究最常用的體外模型之一，被廣泛用于研究風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)溶解、牙周炎等骨骼疾病。

極化方式

巨噬細(xì)胞是具有異質(zhì)性的一類免疫細(xì)胞，在體內(nèi)外不同環(huán)境影響下可極化為不同表型參與機(jī)體生理、病理反應(yīng)。從激活方式上分為經(jīng)典激活的巨噬細(xì)胞M1和選擇性激活的巨噬細(xì)胞M2。

M1型分化

細(xì)菌和脂多糖（LPS）可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1型分化，產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子，抵抗病原入侵，但也會(huì)造成機(jī)體損傷，在實(shí)驗(yàn)中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小時(shí)誘導(dǎo)其極化；

圖1. a.RAW 264.7 未分化形態(tài)圖 b.RAW 264.7 M1型分化形態(tài)圖

M2型分化

白細(xì)胞介素（IL-4）可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型分化，分泌抗炎細(xì)胞因子，并在組織修復(fù)與重建和腫瘤的形成過程中發(fā)揮作用，在實(shí)驗(yàn)中可采用10ng/mL IL-4作用12小時(shí)誘導(dǎo)其極化。

圖2. RAW 264.7 不同分型形態(tài)圖

鑒定方法

M1、M2具有各自特征性標(biāo)志分子，iNOS、CD86、TNF-α是常見的M1型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志分子，IL-10、Arg-1、CD206是常見的M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志分子。一般在實(shí)驗(yàn)研究中：

WB可以分析RAW264.7細(xì)胞iNOS、YM-1和Arg-1的表達(dá)水平（如圖3）；

圖3. WB分析照射對IL-4誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞YM-1和Arg-1的表達(dá)影響

流式細(xì)胞術(shù)（FCM）可以分析RAW264.7細(xì)胞表面CD86和CD206的表達(dá)（如圖4）；

圖4. 流式細(xì)胞術(shù)分析照射對IL-4誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7細(xì)胞CD206和CD209的表達(dá)

實(shí)時(shí)定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等細(xì)胞因子的表達(dá)及分泌(如圖5）；

圖5. 用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的引物序列

Griess reagent 可以分析細(xì)胞培養(yǎng)上清 NO 生成（如圖6）。

圖6. 不同樣品對RAW 264.7中NO產(chǎn)生的影響

參考文獻(xiàn)

[1] 羅進(jìn)芳, 朱瑞麗, 易浪,等. 青藤堿對LPS、IL-4誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞極化的影響[J]. 中國免疫學(xué)雜志, 2015, 31(1):5.

[2] 陳濤, 梁瀟, 賀明,等. RAW264.7細(xì)胞M1/M2亞型的誘導(dǎo)和鑒定[J]. 中國分子心臟病學(xué)雜志, 2011(2):4.

[3] 解海榮, 李貞, 李海亮 ,等. 不同照射方式對IL-4誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7細(xì)胞極化的影響. 中國輻射衛(wèi)生, 2017, 26(6): 637-641.

[4] Li C, Du Y, Lv H, et al. Injectable Amphipathic Artesunate Prodrug-Hydrogel Microsphere as Gene/Drug Nano-Microplex for Rheumatoid Arthritis Therapy[J]. Adv. Funct. Mater. 2022, 32, 2206261.

[5] Li P , Hao Z , Wu J , et al. Comparative Proteomic Analysis of Polarized Human THP-1 and Mouse RAW264.7 Macrophages[J]. Frontiers in Immunology, 2021, 12:700009.

[6] Ji-Eun Lee, Jae Hoon Lee, Byungrok Min,et al. Immunostimulatory effect of egg yolk phosvitin phosphopeptides produced by high-temperature and mild-pressure pretreatment and enzyme combinations in RAW 264.7 cells via TLR2/MAPK signaling pathway[J].Journal of Functional Foods，Volume 98，2022，105264.