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?直接將細胞懸液于1200rpm（約250g）3分鐘離心后盡量吸干凈上清，收集細胞沉淀；

? 去上清，用配置好的凍存液重懸細胞，一個T25培養(yǎng)瓶長到傳代密度時的細胞量可凍存1支，或者細胞計數(shù)后，按照3~5×10⁶cells/支凍存，凍存液用量推薦0.5~1mL/支；

? 分裝完畢后，擰緊凍存管蓋并做好標記；

? 將分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒，放入-80℃冰箱過夜；

? 再轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。

應選擇匯合度80%-90%左右，處于對數(shù)生長期時的細胞進行凍存操作，確保細胞凍存時狀態(tài)最佳，凍存密度可根據(jù)細胞特性進行調(diào)整；

程序凍存盒、細胞凍存液、完全培養(yǎng)基等試劑都要復溫至室溫備用；

凍存前注意切勿消化時間過長、吹打力度過重、離心轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長，以免造成細胞損傷；

凍存細胞長期保存應放置于液氮，不建議在-80℃長期保存；

若沒有程序降溫盒，則按下列順序依次降溫：室溫→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃過夜→液氮保存，注意轉(zhuǎn)移過程中要保冷，避免產(chǎn)生溫差或凍存管融化。